[發(fā)明專利]用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物、試劑盒及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111594414.8
• 申請(qǐng)日: 2021-12-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114250302B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉青;王偉偉;李秀蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京北匯律師事務(wù)所 11711
• 代理人: 李英杰

本發(fā)明公開(kāi)用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物、試劑盒及用途，其中該組合物包括能夠指示生物樣品中ACTR3B基因狀態(tài)的試劑，當(dāng)檢測(cè)到ACTR3B基因內(nèi)部或其附近存在HPV基因插入時(shí)，將所述宮頸狀態(tài)診斷為宮頸上皮內(nèi)瘤變。本發(fā)明基于納米孔測(cè)序，確定了宮頸上皮內(nèi)瘤變特異性基因，進(jìn)一步通過(guò)Sanger測(cè)序進(jìn)行了可靠性驗(yàn)證。因此，本發(fā)明為診斷或鑒別宮頸病變、陰道鏡分流及CIN I級(jí)是否干預(yù)等，特別是區(qū)分宮頸炎癥和宮頸CIN提供了有效手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物、試劑盒及用途。

背景技術(shù)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)屬于子宮頸上皮非典型增生，其為一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程，分為I、II、III三級(jí)，即低、中和高三種程度。高度CIN是指非典型病變以累及上皮全層但未向基底膜浸潤(rùn)，又稱宮頸原位癌。繼續(xù)發(fā)展可向基底膜下浸潤(rùn)，可形成宮頸浸潤(rùn)癌。低度CIN病變是指子宮頸上皮非典型增生僅累及上皮全層的上1/3。CIN是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程，但及時(shí)治療可以逆轉(zhuǎn)，恢復(fù)正常。因此，CIN的診斷，對(duì)于預(yù)防或早期干預(yù)宮頸癌具有重要意義。

目前，對(duì)于CIN主要是細(xì)胞檢查。具體地，通過(guò)液基薄層細(xì)胞試劑盒采集宮頸口的脫落細(xì)胞，使用全自動(dòng)薄層細(xì)胞制片機(jī)制片，并根據(jù)細(xì)胞核形態(tài)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類診斷是否具有癌變病變。該檢查手段對(duì)于CIN而言準(zhǔn)確性和特異性差，經(jīng)常出現(xiàn)漏檢情況，并且由于CIN與宮頸炎的病變類似，通過(guò)細(xì)胞檢查也不能很好將兩者區(qū)分。

近年來(lái)，隨著人類乳頭狀瘤病毒(HPV)感染與下生殖道關(guān)系研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)HPV感染與CIN的發(fā)生有著一定的關(guān)聯(lián)。HPV感染作為一種特殊類型的性傳播疾病，是CIN和宮頸癌發(fā)生的病因。分子生物學(xué)及流行病學(xué)研究表明人類乳頭狀瘤病毒有致癌性。HPV根據(jù)其致癌性不同可分為不同類型：HPV16、18、45、56為高危型，HPV31、33、35等11種為中危型，HPV6、11、26等8種為低危型。因此探尋CIN的特異性生物標(biāo)志物具有重要意義。

CN104870653A公開(kāi)了一種用于HPV誘導(dǎo)的浸潤(rùn)性癌癥及其高度前期病變的分子診斷標(biāo)志物PRDM14和FAM19A4，其包括檢測(cè)細(xì)胞中PRDM14和/或FAM19A4基因中的超甲基化，而這樣的超甲基化表明存在具有浸潤(rùn)潛力的HPV誘導(dǎo)的前期病變和HPV誘導(dǎo)的浸潤(rùn)性癌癥。

然而，目前沒(méi)有用于對(duì)CIN與早期病變進(jìn)行有效區(qū)分的分子標(biāo)記。

背景技術(shù)中的信息僅僅在于說(shuō)明本發(fā)明的總體背景，不應(yīng)視為承認(rèn)或以任何形式暗示這些信息構(gòu)成本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明在收集宮頸高危型HPV感染無(wú)上皮內(nèi)瘤變的TCT樣品、宮頸病變CIN I、CINII、CIN III的TCT或新鮮組織樣品及宮頸癌的TCT或新鮮組織樣品的基礎(chǔ)上，利用三代納米孔技術(shù)，基于探針雜交捕獲原理對(duì)HPV DNA整合位置進(jìn)行檢測(cè)，得到不同分期樣品中HPV整合信息，進(jìn)一步分析得到能夠很好地區(qū)別宮頸炎和CIN的特異性標(biāo)志物，用于輔助臨床早期診斷和治療。具體地，本發(fā)明包括以下內(nèi)容。

本發(fā)明的第一方面，提供一種用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物，其包括能夠指示生物樣品中ACTR3B基因狀態(tài)的試劑。

根據(jù)本發(fā)明所述的用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物，優(yōu)選地，所述生物樣品來(lái)源于HPV感染受試者的宮頸組織。

根據(jù)本發(fā)明所述的用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物，優(yōu)選地，進(jìn)一步包括能夠指示生物樣品中DOCK3基因狀態(tài)的試劑。

根據(jù)本發(fā)明所述的用于宮頸上皮內(nèi)瘤變檢測(cè)的組合物，優(yōu)選地，所述試劑包括條碼接頭和條碼引物，并通過(guò)包括以下步驟的方法來(lái)指示所述DOCK3基因或ACTR3B基因的狀態(tài)：

a.從受試者采集生物樣品，并分離DNA，得到長(zhǎng)度為1-3Kb的DNA片段；