[發明專利]磁珠法質粒提取試劑盒、制備方法及質粒提取方法

在審

• 申請號: 202111594380.2
• 申請日: 2021-12-23
• 公開（公告）號: CN114395553A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 肖曉文;喻春函;曹文剛;杜軍
• 申請（專利權）人: 北京擎科生物科技有限公司;湖北擎科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606
• 代理人: 王賽

本發明公開了一種磁珠法質粒提取試劑盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脫液；所述SⅠ溶液用于裂解細胞，釋放核酸；所述SⅡ溶液用于將蛋白等雜質沉淀；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修飾的多個羧基基團，所述磁珠Ⅰ能夠吸附蛋白等雜質沉淀，從而將其去除；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ，用于結合質粒。本發明還提供了所述磁珠法質粒提取試劑盒的制備方法。本發明還提供了利用該試劑盒進行質粒提取的方法。

技術領域

本發明涉及核酸提取技術領域，具體涉及一種磁珠法質粒提取試劑盒、制備方法及質粒提取方法。

背景技術

在分子生物技術中，核酸的提取也至關重要。經過長期的發展，提取核酸的方法有很多種，目前最常用的核酸提取方法是離心吸附柱提取和磁珠法提取。離心吸附柱提取質粒需要經過多次離心，難以實現自動化，并且受限于離心機對樣本數量處理有一定限制。磁珠法核酸提取試劑盒配套自動化核酸提取儀能夠實現核酸提取的自動化和高通量。但現階段的磁珠法質粒提取方法，主要是用在菌體裂解離心除去大部分雜質后進行自動化提取，通過離心除去雜質這一步大幅增加了樣本處理的人工成本，且限制了質粒提取的自動化范圍。

發明內容

基于此，有必要針對上述問題，提供一種能夠使質粒提取過程免于離心的磁珠法質粒提取試劑盒、制備方法及質粒提取方法，對實現質粒提取的全程自動化具有決定性的意義。

本發明的第一目的在于提供一種磁珠法質粒提取試劑盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脫液；

所述SⅠ溶液中含有氫氧化鈉、十二烷基硫酸鈉和乙二胺四乙酸或其鹽；

所述SⅡ溶液中含有鉀鹽和酸性pH調節劑；

所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修飾的多個羧基基團，所述多羧基化合物中至少含有兩個羧基；

所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ、醇和乙酸鈉，所述磁珠Ⅱ用于結合核酸。

在其中一個實施例中，所述多羧基化合物選自檸檬酸、乙二胺四乙酸、酒石酸和這些化合物相應的鹽中的一種或多種。

在其中一個實施例中，所述磁珠Ⅰ表面修飾的羧基基團通過在其制備過程中加入所述多羧基化合物得到。

本發明的第二目的在于提供所述磁珠法質粒提取試劑盒的制備方法，其包括將各組分按照配比分別混合。

在其中一個實施例中，所述磁珠Ⅰ溶液的制備方法包括：

將二價鐵化合物、三價鐵化合物和水混合，在無氧條件下，攪拌；

在攪拌后的混合物中加入氨水，在第一溫度下進行反應，所述第一溫度為50℃～120℃；

在所述第一溫度反應后得到的產物中加入所述多羧基化合物和抗氧化劑，在第二溫度下攪拌反應，所述第二溫度為50℃～120℃；

將所述第二溫度反應后得到的產物用水進行磁分離洗滌，直至洗滌液pH值為6.5～7.5；

將洗滌后的產物與含有所述多羧基化合物的溶液混合。

本發明的第三目的在于提供利用所述的磁珠法質粒提取試劑盒進行質粒提取的方法，包括以下步驟：

將含有菌液的樣品與所述SⅠ溶液混合，得到第一混合液；

將所述第一混合液、所述SⅡ溶液和所述磁珠Ⅰ溶液混合，得到第二混合液；

對所述第二混合液進行磁吸分離，收集得到第一上清液；

將所述第一上清液與所述磁珠Ⅱ溶液混合，得到第三混合液；