[發明專利]多囊卵巢綜合征樣小鼠伴糖脂代謝異常模型構建方法

在審

• 申請號: 202111590899.3
• 申請日: 2021-12-23
• 公開（公告）號: CN115413623A
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 吳錦林
• 申請（專利權）人: 重慶市中醫院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K49/00
• 代理公司: 重慶信必達知識產權代理有限公司 50286
• 代理人: 張文莉

本發明屬于動物模型構建技術領域，公開了一種多囊卵巢綜合征樣小鼠伴糖脂代謝異常模型構建方法，多囊卵巢綜合征樣小鼠伴糖脂代謝異常模型構建方法包括：將雙氫睪酮粉劑用DMSO溶解為50μg/μL，再用玉米油稀釋為1μg/μL，震蕩直至充分溶解，得雙氫睪酮混合溶液；選取小鼠，并飼喂選取的小鼠高脂飼料；通過皮下注射預先制備的雙氫睪酮混合溶液，得到多囊卵巢綜合征樣小鼠伴糖脂代謝異常模型。本發明聯合DHT皮下注射和高脂飲食成功誘導出了小鼠卵巢多囊樣改變及動情周期改變，伴隨糖耐量及胰島素敏感性下降，血脂譜及體脂肪質量亦明顯升高，造模時間較短，為PCOS發病機制的實驗研究提供了一種較好的小鼠模型。

技術領域

本發明屬于動物模型構建技術領域，尤其涉及一種多囊卵巢綜合征樣小鼠伴糖脂代謝異常模型構建方法。

背景技術

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是育齡期女性主要的生殖障礙性疾病，以高雄激素癥狀、月經紊亂及多囊卵巢為主要特點，其臨床表型和生化特點異質性較大，發病機制現仍未完全闡明，可能與遺傳、母體激素和代謝紊亂環境、表觀遺傳和環境影響等因素相關。動物模型有助于幫助學者研究其病因和病理生理學機制，了解其發生的起源，以及對其發病進行預測和預防，但現目前因缺乏容易獲得的實驗誘導的涵蓋PCOS多種復雜表型的動物模型，很大程度上阻礙了PCOS的基礎研究及臨床治療進展。此外，PCOS患者存在β細胞功能受損及胰島素敏感性下降，發生2型糖尿病(type2 diabetesmellitus，T2DM)、高脂血癥、代謝綜合征及心血管疾病風險也會增高，故亦是一種代謝障礙性疾病，這大大增加了PCOS臨床管理的復雜性。隨著BMI的增加，PCOS的患病率可從正常BMI的5％增加到肥胖BMI的15％，同時會增加PCOS表型的嚴重程度，還能獨立于高雄激素影響PCOS女性的生殖功能。考慮到30％～50％的PCOS患者體型是正常的，故體重正常和肥胖PCOS相關的發病機制可能有不同的分子基礎。肥胖和糖代謝異常、脂代謝異常有密切關系，因此，建立反映一系列代謝表型的PCOS樣模型是至關重要的。

然而，現目前尚無成熟的PCOS樣伴糖脂代謝異常的模型。新發表的國際 PCOS評估和管理指南推薦以下3項滿足2項，同時排除其他內分泌相關疾病即可診斷PCOS：稀發排卵或無排卵；高雄激素的臨床表現和(或)高雄激素血癥；超聲檢查卵巢多囊樣改變。因沒有特定某些物種PCOS的診斷標準，PCOS的動物模型并沒有金標準，學者們往往是力求復制出2個或更多類似于PCOS的臨床診斷標準的特征組合，稱為PCOS樣模型。嚙齒類動物是一種經濟、易于操作、生殖周期短的通用工具，已有多種PCOS的大鼠及小鼠模型研究，包括雄激素、雌激素、芳香化酶抑制劑、光暴露改變和遺傳操作等干預方法。高雄激素血癥是PCOS最一致的特征，因此最直接的造模方式就是使用雄激素來建立模型，包括睪酮、丙酸睪酮、脫氫表雄酮(dehydroepiandrosterone，DHEA)、雙氫睪酮(dihydrotestosterone，DHT)和來曲唑。因為雄激素、丙酸睪酮均可在體內轉化為雌二醇，故難以界定PCOS病理生理中雄激素介導的機制到底是通過雄激素受體或者雌激素受體而發揮作用，此法已很少使用。PCOS女性血清的DHEA水平明顯升高，雖然有報道DHEA的青春期大鼠的短期(20天)干預可誘導PCOS無周期和無排卵的生殖特征，但卵巢主要是大囊狀卵泡為主，與 PCOS女性的竇前卵泡和小竇卵泡增多不符，且DHEA青春期小鼠長期干預(90 天)根本沒有任何卵巢、生殖內分泌及糖脂代謝紊亂的改變，說明DHEA對生殖影響可能是短期的。來曲唑是一種芳香化酶抑制劑，可以阻止雄激素向雌激素的轉化，從而提高循環和卵巢雄激素水平。用來曲唑干預青春期小鼠或者大鼠，雖可見多囊樣卵巢改變，但不能誘導腹型肥胖、胰島素抵抗及血脂等改變，在代謝方面的表型不明顯，說明來曲唑誘導的PCOS樣模型在研究代謝機制方面存在局限性。DHT為雄激素的非芳香化產物，不能轉換為雌激素，對雄激素受體親和力高，在體內的生物活性明顯強于睪酮。現有的嚙齒類PCOS模型認可度較高的主要是給予皮下植入可持續90天釋放DHT控釋劑(含2.5mg雙氫睪酮，27.5μg/d)83μg)(購置于Innovative Research of America,Sarasota,FL)來實現。但Innovative Research of America公司已不再出口本國以外的國家雄激素緩釋劑型，導致建立模型受阻。另外，同以上使用其他雄激素方法一樣，單獨使用DHT 并不能完全體現代謝方面的特征。