[發明專利]艾塞那肽的前處理及其得到的His氨基酸洗脫液中異構體的檢測方法

在審

• 申請號: 202111578449.2
• 申請日: 2021-12-22
• 公開（公告）號: CN114280179A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 夏歡;李淑君
• 申請（專利權）人: 北京美福潤醫藥科技股份有限公司;北京萬鵬朗格醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/74
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 霍苗

本發明屬于分析化學技術領域，提供了艾塞那肽的前處理及其得到的His氨基酸洗脫液中異構體的檢測方法。本發明將待測艾塞那肽進行水解和氨基酸分離，收集His氨基酸洗脫液；利用高效液相色譜對所述His氨基酸洗脫液進行手性分析；所述高效液相色譜的條件包括：色譜柱：CROWNPAKCR(+)150*4.0mm 5μm；流動相：pH值為1.0的高氯酸水溶液。本發明先將艾塞那肽進行水解，得到氨基酸混合物，再利用高效液相色譜分離將氨基酸混合物中的His氨基酸進行分離，得到His氨基酸洗脫液，前處理方法操作簡單；再通過控制色譜柱類型和流動相組成，實現了His氨基酸中不同異構體的分離和測定，且數據重現性好。

技術領域

本發明涉及分析化學技術領域，尤其涉及艾塞那肽的前處理及其得到的His氨基酸洗脫液中異構體的檢測方法。

背景技術

艾塞那肽(Exenatide)是胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物，用于改善II型糖尿病患者的血糖控制，適用于單用二甲雙胍、磺酰脲類以及二甲雙胍合用磺酰脲類，血糖仍控制不佳的患者。艾塞那肽能夠有效保護胰島β細胞功能，持久有效地控制血糖，合理減輕患者體重，改善心血管危險因素、提高胰島素敏感性。艾塞那肽在治療II型糖尿病(T2DM)中有較大的優勢。

艾塞那肽的合成過程暴露在偏堿性環境下，部分拼接的氨基酸會在該條件下由L構型轉化為D構型，故需對艾塞那肽的異構體進行定量檢驗。艾塞那肽的異構體包括L-His¹艾塞那肽和D-His¹艾塞那肽。美國藥典收載了艾塞那肽的異構體D-His¹艾塞那肽檢測的方法，包括以下步驟：先水解，再進行衍生化；再采用GC-MS進行分離定量檢測。但是，前處理的衍生化，操作繁瑣不易掌握。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供艾塞那肽的前處理及其得到的His氨基酸洗脫液中異構體的檢測方法。本發明提供的前處理方法操作簡單。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種艾塞那肽的前處理方法，包括以下步驟：

將待測艾塞那肽進行水解，得到水解體系；

將所述水解體系進行氨基酸分離，得到His氨基酸洗脫液；

所述氨基酸分離為高效液相色譜分離；

所述高效液相色譜分離的參數包括：

色譜柱：Comixshell CARP 2.7μ150*4.6mm；

流動相體系包括流動相A和流動相B；

所述流動相A：10mL乙腈+0.1mL 85wt％磷酸+490mL水；

所述流動相B：50mL乙腈+0.4mL 85wt％磷酸+150mL水；

梯度洗脫為：

0min：流動相A的體積分數為100％；

0～20min：流動相A的體積分數由100％勻速變為0％；

20～20.1min：流動相A的體積分數由0％勻速變為100％；

20.1～35％：流動相A的體積分數維持100％。

優選地，所述流動相體系的流速為0.8～1.2mL/min。

優選地，所述色譜柱的溫度為20～35℃。

優選地，所述高效液相色譜分離的參數還包括：檢測波長為200nm。

優選地，所述水解的試劑包括鹽酸或氘代鹽酸。