[發明專利]一種重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法有效
| 申請號： | 202111571277.6 | 申請日： | 2021-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN114231481B | 公開（公告）日： | 2023-07-18 |
| 發明（設計）人： | 仲苓芝;李美蓉;付小兵;侯倩 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍總醫院 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 石家莊領皓專利代理有限公司 13130 | 代理人： | 吳瑾 |
| 地址： | 100000*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 編程 真皮 纖維 細胞 內皮 化學 誘導 方法 | ||
1.一種重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）分離培養小鼠皮膚中成纖維細胞：小鼠處死后剝離周身皮膚組織，酶解消化后得到的細胞再進行傳代培養即得成纖維細胞；
（2）化合物FSK對成纖維細胞誘導：向步驟（1）的成纖維細胞中加入FSK溶液，進行誘導，即得誘導后細胞；
所述步驟（2）中FSK溶液采用DMSO溶解，濃度為5-15μmol/L；
所述步驟（2）中誘導孵育5-14天；
所述步驟（1）中采用的小鼠為新生1天小鼠。
2.根據權利要求1所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述步驟（1）中采用的小鼠為新生1天小鼠，處死后消毒、清洗再進行周身皮膚組織的剝離。
3.根據權利要求2所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述消毒采用75%酒精，清洗采用0.85～0.9%的生理鹽水。
4.根據權利要求1所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述步驟（1）中酶解消化采用0.1-0.3%的I型膠原酶消化50-120min。
5.根據權利要求1所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述步驟（1）中傳代培養的培養基為添加10%胎牛血清的H-DMEM。
6.根據權利要求1所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述步驟（1）中傳代培養在37℃CO2培養箱中進行孵育傳代培養。
7.根據權利要求1所述的重編程真皮成纖維細胞為內皮祖細胞的化學誘導方法，其特征在于，所述步驟（2）中FSK溶液濃度為10μmol/L。
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