[發明專利]用于檢測豬圓環病毒2型的紅色乳膠微球免疫層析試紙條及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202111565323.1 | 申請日： | 2021-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN114487396A | 公開（公告）日： | 2022-05-13 |
| 發明（設計）人： | 馮力;黃立平;劉長明;危艷武 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心) |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/532;G01N33/58;C07K16/08;C12N5/20 |
| 代理公司： | 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139 | 代理人： | 馬鑫 |
| 地址： | 150009 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 檢測 圓環 病毒 紅色 乳膠 免疫 層析 試紙 及其 制備 方法 應用 | ||
1.用于檢測豬圓環病毒2型的紅色乳膠微球免疫層析試紙條，其特征在于，所述的試紙條包括PVC底板，以及在PVC底板上從左到右依次組裝的結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述的結合墊上涂覆有紅色乳膠微球偶聯的抗豬圓環病毒2型病毒單克隆抗體7C7，所述的硝酸纖維素膜設有包被抗豬圓環病毒2型病毒單克隆抗體9H4的檢測線以及包被山羊抗鼠IgG的質控線；
其中，所述的抗豬圓環病毒2型單克隆抗體7C7，命名為mAb 7C7，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC No.23871，保藏日期為2021年11月18日；
其中，所述的抗豬圓環病毒2型單克隆抗體9H4，命名為mAb9H4，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC No.23870，保藏日期為2021年11月18日。
2.如權利要求1所述的紅色乳膠微球免疫層析試紙條，其特征在于，紅色乳膠微球偶聯的抗豬圓環病毒2型單克隆抗體7C7按照15ul/cm噴涂于玻璃纖維上作為結合墊，其中，單克隆抗體7C7和紅色乳膠微球的標記比例為100μg：1mg；檢測線上單克隆抗體9H4和質控線上山羊抗鼠IgG的濃度均0.5mg/ml。
3.如權利要求1所述的紅色乳膠微球免疫層析試紙條，其特征在于，檢測線與質控線的距離為1cm。
4.如權利要求1所述的紅色乳膠微球免疫層析試紙條，其特征在于，紅色乳膠微球偶聯的抗豬圓環病毒2型單克隆抗體7C7通過以下方法制備得到：
取1mg紅色乳膠微球溶液，80HZ超聲5min，用超純水稀釋200倍，然后10000rpm離心10min，洗去上清，沉淀用pH＝5.6的1000μl 0.1M的檸檬酸緩沖液溶解，80HZ超聲5min；獲得的溶液在磁力攪拌下緩慢加入100μl濃度為1mg/ml純化后的抗豬圓環病毒2型單克隆抗體7C7，室溫緩慢攪拌2h后緩慢加入50g/LBSA使其終濃度為10g/L，繼續攪拌1小時后10000rpm離心1h；沉淀用0.1M PBS溶解，80HZ超聲5min，反復洗滌3次，最終沉淀用0.1M PBS溶解至原體積的1/20，得到紅色乳膠微球偶聯的抗豬圓環病毒2型病毒單克隆抗體7C7溶液。
5.權利要求1-4任一項所述的紅色乳膠微球免疫層析試紙條在制備檢測豬圓環病毒2型試劑中的應用。
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