[發明專利]一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法

在審

• 申請號: 202111562380.4
• 申請日: 2021-12-20
• 公開（公告）號: CN114308154A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 李子洋
• 申請（專利權）人: 蘇州貝蒂克生物技術有限公司
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00
• 代理公司: 合肥市都耒知識產權代理事務所(普通合伙) 34227
• 代理人: 邱丹

本發明涉及生物技術領域，且公開了包括以下步驟：S1、將基片清洗干凈后，將處理好的基底放入等離子體真空設備中，等離子體處理2?5min；S2、加入裝有氨基硅烷的25ml的燒瓶中，緩慢攪拌加入穩定劑N?羥基琥珀酰亞胺0.5ml，充分反應0.5?1h得到環氧基硅烷試劑，再加入對苯二甲醛4ml，取出合成好的環氧基硅烷試劑；S3、將等離子體處理好的基片放入環氧基硅烷的真空氛圍中，通過真空緩慢揮發來修飾基片得到環氧基硅烷芯片。本發明提出一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法，本發明解決了氨基片接點作用力小，點樣不勻，與醛基修飾相比很大程度上提升了芯片的信號強度，可廣泛應用在各類生物芯片上。

技術領域

本發明涉及生物領域，尤其涉及一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法。

背景技術

生物芯片技術作為一種可以進行高通量多樣品平行分析的重要工具，已經開始廣泛應用于基因組學研究、單核苷酸多態性分析、臨床醫學檢驗等方面。它將大量的生物大分子探針、基因片段、寡聚核苷酸或蛋白質等按特定方式排列在特殊載體的固定位置上，在特定條件下與待檢樣品進行作用，通過精密的掃描儀器進行記錄、檢測、分析，具有自動化程度高、檢測目的分子數量較多、高通量等優點。

生物芯片一般來說選擇經過相應處理的硅片、玻璃片、金屬片、塑料片或聚丙烯膜、硝酸纖維素膜等作為載體。以玻璃片為載體的二維表面修飾有氨基修飾、醛基修飾、巰基修飾及聚賴氨酸修飾等，這類載體大部分通過一些分子間親和力或共價鍵把基因或蛋白探針固定在其表面，這種方法成本較低、便于制備、重復性好、熒光背景相對較低。但是仍存在一定缺陷，如探針固定量較小、表面均一性差、點樣點不夠規整以及表面官能團與探針之間發生非特異性交互作用使玻璃片背景增高等問題。三維表面修飾是在玻璃片表面包一層凝膠或樹突狀多聚物，然后再引入活性基團，從而在玻璃片表面形成三維立體結構。由于三維多孔結構，載體表面與探針接觸面積大大增加，從而固定量也增加，提高了固定效率；另外，凝膠內濕潤微環境使固定在上面的蛋白質溶液不易蒸發，從而保持了蛋白的活性。但是由于這些納米級的多孔材料結構較為復雜，使得微陣列上的各種生物大分子探針間的距離控制較為困難，探針及多孔材料之間的交互作用因此增強，導致檢測時的背景增高；此外，這些大分子多孔材料的使用給微陣列的后續洗脫也帶來了問題。因此有良好的生物分子結合能力和表面質量高、背景低、信號強度高的生物芯片基片的發明勢在必行。

為解決上述問題，本申請中提出一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法。

發明內容

(一)發明目的

為解決背景技術中存在的技術問題，本發明提出一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法，本發明解決了氨基片接點作用力小，點樣不勻，與醛基修飾相比很大程度上提升了芯片的信號強度，可廣泛應用在各類生物芯片上。

(二)技術方案

為解決上述問題，本發明提供了一種雙環氧基修飾的生物芯片基片的制備方法，包括以下步驟：

S1、將基片清洗干凈后，將處理好的基底放入等離子體真空設備中，等離子體處理2-5min；

S2、加入裝有氨基硅烷的25ml的燒瓶中，緩慢攪拌加入穩定劑N-羥基琥珀酰亞胺0.5ml，再加入對苯二甲醛4ml，充分反應0.5-1h得到環氧基硅烷試劑，取出合成好的環氧基硅烷試劑；

S3、將等離子體處理好的基片放入環氧基硅烷的真空氛圍中，通過真空緩慢揮發來修飾基片得到環氧基硅烷芯片；

S4、取出基片，將適宜濃度的寡核苷酸探針或PCR產物，抗原抗體，室溫下，將配置好的點樣液直接通過移液槍或者點樣機點在芯片功能位點處，對于免疫體系，芯片點完液之后放置在濕度20-30％的條件下并且溫度控制在37℃孵育四個小時；溫度控制在25℃室溫，濕度控制在70％左右；

S5、探針與環氧基的結合點樣后，將芯片放入芯片盒中；