[發明專利]構建產L-纈氨酸的重組微生物的方法及其所用核酸分子

在審

• 申請號: 202111562236.0
• 申請日: 2021-12-20
• 公開（公告）號: CN114317583A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 孟剛;魏愛英;趙春光;畢國棟;賈慧萍;田斌
• 申請（專利權）人: 寧夏伊品生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/77
• 分類號: C12N15/77;C12N15/31;C07K14/34;C12N1/21;C12P13/08;C12R1/15
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種構建重組微生物的方法，其特征在于，所述方法包括至少下述任一種：

F1)將編碼蛋白質的核酸分子導入目的微生物，得到所述重組微生物，所述蛋白質為下述任一種：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白質，

A2)將SEQ ID No.4所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與A1)所示的蛋白質具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白質，

A3)在A1)或A2)的N端和/或C端連接標簽得到的具有相同功能的融合蛋白質；

F2)將SEQ ID No.1所示的DNA分子導入目的微生物，得到所述重組微生物；

F3)利用基因編輯手段對SEQ ID No.1所示的DNA分子進行編輯，使目的微生物中含有SEQ ID No.3所示的DNA分子。

2.權利要求1中所述的蛋白質。

3.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子為下述任一種：

B1)編碼權利要求1或2中所述蛋白質的核酸分子；

B2)編碼序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子；

B3)核苷酸序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子。

4.生物材料，其特征在于，所述生物材料為下述任一種：

C1)含有權利要求3所述核酸分子的表達盒；

C2)含有權利要求3所述核酸分子的重組載體、或含有C1)所述表達盒的重組載體；

C3)含有權利要求3所述核酸分子的重組微生物、或含有C1)所述表達盒的重組微生物、或含有C2)所述重組載體的重組微生物。

5.D1)-D8)中任一項的下述任一種應用：

F1)D1)-D8)中任一項在調控微生物的L-纈氨酸的產量中的應用；

F2)D1)-D8)中任一項在構建產L-纈氨酸的基因工程菌中的應用；

F3)D1)-D8)中任一項在制備L-纈氨酸中的應用；

其中，所述D1)-D8)為：

D1)權利要求1或2中所述的蛋白質；

D2)權利要求3所述的核酸分子；

D3)權利要求4所述的生物材料；

D4)核苷酸序列為SEQ ID No.1的DNA分子；

D5)SEQ ID No.1所示的核苷酸序列經過修飾和/或一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加得到的與SEQ ID No.1所示的DNA分子具有90％以上的同一性，且具有相同功能的DNA分子；

D6)含有D4)或D5)中所述DNA分子的表達盒；

D7)含有D4)或D5)中所述DNA分子的重組載體、或含有D6)所述表達盒的重組載體；

D8)含有D4)或D5)中所述DNA分子的重組微生物、或含有D6)所述表達盒的重組微生物、或含有D7)所述重組載體的重組微生物。

6.一種提高微生物中L-纈氨酸的產量的方法，其特征在于，所述方法包括下述任一種：

E1)提高目的微生物中的權利要求3所述核酸分子的表達量或含量，得到L-纈氨酸的產量高于所述目的微生物的微生物；

E2)提高目的微生物中的權利要求5中D4)或D5)所述DNA分子的表達量或含量，得到L-纈氨酸的產量高于所述目的微生物的微生物；

E3)對所述目的微生物中的核苷酸序列為SEQ ID No.1的DNA分子進行突變，得到L-纈氨酸的產量高于所述目的微生物的微生物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述突變為點突變。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述點突變為將SEQ ID No.1所示DNA分子編碼的氨基酸序列的第36位的脯氨酸殘基突變為另一種殘基。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述點突變為將SEQ ID No.1所示DNA分子編碼的氨基酸序列的第36位的脯氨酸突變為絲氨酸，得到氨基酸序列為SEQ ID No.4的突變蛋白質。

10.一種制備L-纈氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括利用權利要求1和/或4和/或5中所述的重組微生物生產L-纈氨酸。