[發(fā)明專利]非人動(dòng)物的眼房水的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111561185.X
• 申請(qǐng)日: 2021-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN113943697B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁方榮;王海平;王劍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京億里生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/073
• 分類號(hào): C12N5/073
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 莫舒穎

本發(fā)明提供了非人動(dòng)物的眼房水的應(yīng)用。本發(fā)明所提供應(yīng)用為非人動(dòng)物的眼房水在制備哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)用的體外胚胎培養(yǎng)液中的應(yīng)用，以及非人動(dòng)物的眼房水在作為哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)用的體外胚胎培養(yǎng)液中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，動(dòng)物眼房水可以作為體外胚胎培養(yǎng)液的基礎(chǔ)液，且眼房水和CR1aa培養(yǎng)液按體積比1:1混合培養(yǎng)所得的體外胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)后，牛體外受精胚胎囊胚質(zhì)量相比于單獨(dú)使用眼房水或CR1aa培養(yǎng)液培養(yǎng)的胚胎更好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及非人動(dòng)物的眼房水的應(yīng)用。

背景技術(shù)

家畜胚胎的體外生產(chǎn)技術(shù)（IVP）是胚胎工程研究領(lǐng)域的一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)，是研究發(fā)育生物學(xué)、動(dòng)物生殖生理學(xué)的基礎(chǔ)，同時(shí)體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)對(duì)于促進(jìn)家畜遺傳進(jìn)展、保存稀有物種和胚胎商業(yè)化生產(chǎn)提供了技術(shù)保障[1]。

目前在牛、羊的體外胚胎生產(chǎn)中，國(guó)內(nèi)外學(xué)者己經(jīng)開發(fā)出了多種體外發(fā)育培養(yǎng)液，如TCM199[2]，輸卵管合成液（synthetic oviduct fluid，SOF）[3]，CR1［4］等。然而，當(dāng)前無(wú)論從胚胎形態(tài)還是物質(zhì)代謝方面，體外培養(yǎng)的胚胎在質(zhì)量上都還達(dá)不到體內(nèi)胚胎的水平[5]。例如在牛的體外胚胎培養(yǎng)中，目前最常使用的培養(yǎng)液為（CR1aa和SOF液），所培養(yǎng)的牛體外受精的囊胚發(fā)育率較低，而且胚胎質(zhì)量也遠(yuǎn)不及體內(nèi)胚胎，導(dǎo)致胚胎移植受體后的妊娠率低，因此如何提高囊胚發(fā)育率及胚胎質(zhì)量成為體外受精胚胎生產(chǎn)的重點(diǎn)和研究的焦點(diǎn)。

通常情況下，大多數(shù)學(xué)者對(duì)于評(píng)價(jià)體外胚胎質(zhì)量的優(yōu)劣以及后期發(fā)育潛力，主要是通過(guò)在顯微鏡下觀察胚胎在特定發(fā)育時(shí)期下的形態(tài)是否正常，發(fā)育過(guò)程是否符合培養(yǎng)日齡，胚胎卵裂率及囊胚發(fā)育率以及囊胚總細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)來(lái)評(píng)判。同時(shí)通過(guò)對(duì)體外生產(chǎn)的囊胚細(xì)胞進(jìn)行滋養(yǎng)層細(xì)胞（TE）和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞（ICM）的差異染色方法，對(duì)不同培養(yǎng)體系下的囊胚細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞和滋養(yǎng)層細(xì)胞分染，統(tǒng)計(jì)各自細(xì)胞數(shù)和比例，直觀判斷囊胚的質(zhì)量，也是一個(gè)有效的方法。并且此種方法近年來(lái)己在多種動(dòng)物的胚胎質(zhì)量鑒定中被廣泛采用[6]。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)于背景技術(shù)中存在的問(wèn)題與限制，本發(fā)明擬解決的技術(shù)問(wèn)題是如何提高體外胚胎的生產(chǎn)效率。

本發(fā)明首先提供非人動(dòng)物的眼房水在制備哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)用的體外胚胎培養(yǎng)液中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供非人動(dòng)物的眼房水在作為哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)用的體外胚胎培養(yǎng)液中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述體外胚胎培養(yǎng)液為以眼房水和CR1aa培養(yǎng)液按體積比1：1混合而成。

上述應(yīng)用中，所述CR1aa培養(yǎng)液的配制方法如下：將氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、丙酮酸鈉、酚紅、乳酸鈣、牛血清白蛋白、BME、MEM、L-谷氨酰胺、青霉素和鏈霉素溶于水得到CR1aa培養(yǎng)液，使CR1aa培養(yǎng)液中氯化鈉的濃度為114.7 mM、氯化鉀的濃度為3.1 mM、碳酸氫鈉的濃度為26.2 mM、丙酮酸鈉的濃度為20.4 mM、酚紅的濃度為1μL /mL、乳酸鈣的濃度為5mM、牛血清白蛋白的濃度為3mg/mL、必需氨基酸（BME）的濃度為20μL/mL、非必需氨基酸（MEM）的濃度為10μL/mL、L-谷氨酰胺（L-Glutamin）的濃度為1 mmol/L、青霉素和鏈霉素的濃度均為1 %（具體青霉素的濃度為100U/mL，鏈霉素的濃度為100μg/mL）。

上述應(yīng)用中，所述非人動(dòng)物的眼房水來(lái)自家畜動(dòng)物，包括且不限于牛、羊、豬等。

本發(fā)明還保護(hù)一種體外受精胚胎培養(yǎng)的方法，包括將非人動(dòng)物的眼房水用于非人哺乳動(dòng)物體外受精胚胎培養(yǎng)。

上述方法中，所述非人動(dòng)物的眼房水作為哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)時(shí)體外胚胎培養(yǎng)液的組成成分。

上述方法中，所述體外胚胎培養(yǎng)液為前述的體外胚胎培養(yǎng)液。

上述體外胚胎培養(yǎng)液或上述體外受精胚胎培養(yǎng)的方法在動(dòng)物人工輔助生殖中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。