[發明專利]用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202111555106.4
• 申請日: 2021-12-17
• 公開（公告）號: CN114163502A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 胡小蕾;項詩琪;謝亞均;楊曉蘭;吳曉綿;杜堯;鞠尚
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學國際體外診斷研究院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C09K11/06;C12Q1/37;C07K1/13;C07K1/08;C07K1/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 呂小琴

1.一種用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針，其特征在于：所述熒光探針化學結構式為：

其中，n＝2、3、4、5、6；X1，X2均為氨基酸。

2.根據權利要求1所述的用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針，其特征在于：所述X1為亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸中的一種。

3.根據權利要求1所述的用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針，其特征在于：所述X2為絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸中的一種。

4.根據權利要求1所述的用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針的制備方法，其特征在于：將三苯胺AIE分子標記到多肽鏈上制備成用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針。

5.根據權利要求4所述的用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

Fmoc保護的單體用堿性溶劑去除氨基的保護基團，然后通過活化劑活化下一個氨基酸的羧基，活化的單體與游離的氨基反應交聯，形成肽鍵；按上述反應反復循環直到合成完成，之后將多肽從樹脂上洗脫下來，采用脫保護劑洗脫掉碳端氨基酸的保護基團，連接AIE分子。

6.根據權利要求1所述的AIEE熒光探針的3CL蛋白酶檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：將優化濃度后的3CL蛋白酶溶液與探針溶液孵育，并加入Zn²⁺溶液，然后采用350nm波長光激發，得到400nm到600nm之間的發射光譜。

7.根據權利要求1所述的AIEE熒光探針的3CL蛋白酶抑制劑篩選方法，其特征在于：包括以下步驟：

a.將優化濃度后的3CL蛋白酶溶液與探針溶液孵育，并加入Zn²⁺溶液，用350nm波長光激發，得到400nm到600nm之間的發射光譜并計算出該熒光發射光譜的積分面積，即為不加抑制劑時的熒光光譜積分面積；

b.將優化濃度后的3CL蛋白酶溶液先與抑制劑于反應緩沖液中預孵育，然后加入優化濃度的探針溶液和Zn²⁺溶液，用350nm波長光激發，得到400nm到600nm之間的熒光發射光譜，計算出該熒光發射光譜的積分面積，即為加抑制劑后的熒光光譜積分面積；

c.將步驟b中不同濃度的抑制劑溶液直接與探針溶液和Zn²⁺溶液孵育，用350nm波長光激發，得到400nm到600nm之間的熒光發射光譜，計算出該熒光發射光譜的積分面積，即為背景熒光光譜積分面積；

d.將步驟a、b、c中的光譜積分面積代入以下公式：

抑制率＝(不加抑制劑時的光譜積分面積-加抑制劑后的光譜積分面積)/(不加抑制劑時的光譜積分面積-背景光譜積分面積)*100％，計算得到抑制劑對3CL蛋白酶的抑制率，從而進行篩選和IC₅₀值的確定。

8.根據權利要求1所述的用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針的應用，其特征在于：將用于3CL蛋白酶檢測及抑制劑篩選的鋅離子誘導AIEE熒光探針應用于細胞熒光成像。