[發明專利]一種抗HLA-G異構體分子HLA-G5及HLA-G6的單克隆抗體及其用途

在審

• 申請號: 202111551112.2
• 申請日: 2021-12-17
• 公開（公告）號: CN114605543A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 顏衛華
• 申請（專利權）人: 臺州恩澤醫療中心（集團）
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;G01N33/574;G01N33/577;C12N5/20
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

本發明公開了一種抗HLA?G異構體分子HLA?G5及HLA?G6的單克隆抗體及用途，所述單克隆抗體(YWHG?5)由保藏編號為CCTCC NO:202122的雜交瘤產生，采用HLA?G分子重鏈位于α3結構域及HLA?G5/6分子特有的跨膜區氨基酸序列抗原肽(EGLPEPLMLRWSKEGDGGIMS)為免疫原。本發明提供了編碼本發明所述YWHG?5抗體的核苷酸及其編碼氨基酸序列,本發明還提供了所述YWHG?5抗體用于HLA?G異構體分子HLA?G5及HLA?G6免疫組化、免疫印跡及流式細胞術等檢測的用途。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及抗HLA-G異構體抗體(YWHG-5)的以下方面：采用HLA-G分子重鏈α3結構域及HLA-G5/6分子特有的跨膜區氨基酸序列的抗原肽(EGLPEPLMLRWSKEGDGGIMS)為免疫原，制備抗HLA-G異構體HLA-G5及HLA-G6 的抗體(YWHG-5)；編碼本發明所述YWHG-5抗體的核酸分子及氨基酸序列，以及所述抗體(YWHG-5)用于HLA-G5及HLA-G6免疫組化、免疫印跡及流式細胞術檢測等用途。

背景技術

人類白細胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因，全長6.0kb，位于人類第6號染色體短臂遠側6p21.3。在蛋白質翻譯過程中，HLA-G mRNA第 1外顯子編碼信號肽，第2、3和第4外顯子分別編碼細胞外區的α1、α2和α3 結構域，第5位外顯子編碼跨膜區；第6外顯子編碼僅含6個氨基酸殘基的HLA-G 分子胞內段；由于外顯子6內含有終止密碼子，第7外顯子不被轉錄；第8外顯子對應于HLA-G基因的3′UTR。HLA-G初始轉錄產物經選擇性剪接，可產生7 種成熟mRNA，分別編碼7種不同分子量的異構體分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、 -G5、-G6及HLA-G7)。其中HLA-G1、HLA-G2、HLA-G3及HLA-G4含有跨細胞膜區，為膜結合型異構體；HLA-G5、HLA-G6及HLA-G7缺乏跨細胞膜結構，為可溶性異構體。HLA-G1～-G7異構體分子的分子量分別為39kD,31kD,22kD,30kD, 34kD,23kD及16kD。

HLA-G1是由全長HLA-G mRNA編碼，由胞外區α1、α2及α3結構域，跨膜區及胞內結構域組成。HLA-G2缺乏α2結構域，由胞外區α1及α3結構域，跨膜區及胞內結構域組成；HLA-G3缺乏α2和α3結構域，由胞外區α1結構域，跨膜區及胞內結構域組成；HLA-G4缺乏α3結構域，由胞外區α1及α2結構域，跨膜區及胞內結構域組成；HLA-G5及HLA-G6胞外區結構域分別與HLA-G1及 HLA-G2相同，但它們由含有內含子4的HLA-G mRNA編碼，因內含子4中含有終止密碼子，所編碼的蛋白分子缺乏由外顯子5所編碼的跨膜區，形成可溶性HLA-G 分子。編碼HLA-G7的mRNA由于內含子2中含有終止密碼子，胞外區僅含α1結構域及由內含子2所編碼的2個氨基酸殘基相連(圖1)。

在正常生理情況下，HLA-G分子僅表達在母胎界面的絨毛外滋養層細胞，維持妊娠過程中的母胎免疫耐受。病理情況下，HLA-G分子能在腫瘤細胞及病毒感染等病理組織細胞中誘導性表達，與疾病的發生及進展密切相關。HLA-G分子是體內一個重要的免疫致耐分子，也是一種重要的免疫檢查點分子，其免疫抑制功能主要通過結合免疫抑制性受體免疫球蛋白樣轉錄物-2(immunoglobulin-like transcript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白樣轉錄物-4 (ILT4/LILRB2/CD85d),傳遞抑制信號，誘導免疫耐受。具體作用機制有：①與表達在T細胞、NK細胞和B細胞上的ILT2結合，抑制T細胞和NK細胞免疫殺傷活性，及B細胞增殖和抗體分泌等功能。②與樹突狀細胞(DC)上的ILT2、 ILT4結合，抑制DC細胞的成熟和分化，誘導產生耐受性DC細胞。③與骨髓來源抑制性細胞(MDSC)和巨噬細胞(Mф)上的ILT2、ILT4結合，誘導促炎抗腫瘤的M1向免疫致耐性M2細胞分化等。因此，HLA-G在腫瘤等疾病的發生發展中起到重要作用?；贖LA-G為靶點的腫瘤免疫治療已在美國進入I期臨床試驗。