[發明專利]一種骨質疏松癥負離子診斷標志物及其檢測方法

有效

• 申請號: 202111543595.1
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114216984B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 鄧大煒;曾麗娟;潘晨;韋天夫
• 申請（專利權）人: 川北醫學院附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N33/68
• 代理公司: 北京正華智誠專利代理事務所(普通合伙) 11870
• 代理人: 代維凡

本發明提供了一種骨質疏松癥負離子診斷標志物及其檢測方法，標志物包括兩種血清極性負離子，兩種血清極性負離子分別為4?羥基脯氨酸和3?[3?(磺氧基)苯基]丙酸。該標志物可準確反應出患者是否患有骨質疏松癥，具有檢測方便、對人體無放射性損傷的優點，可有效解決現有的雙能X線吸收法存在檢測受限的問題。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種骨質疏松癥負離子診斷標志物及其檢測方法。

背景技術

隨著全球老齡人口的急劇增加，骨質疏松癥的發病率也逐年增加。骨質疏松癥是一種以骨量減少和微結構惡化而導致骨脆性增加為特征的骨骼疾病，常常伴發長期慢性疼痛、畸形、殘疾及不同程度的活動受限，嚴重影響老年人的生活質量與心理健康。目前，早診斷、早治療是骨質疏松主要的治療策略。然而，骨質疏松是一種高度隱匿性疾病，同時缺乏特異、敏感的生物標志物，許多患者在發生骨折后才被確診。目前，雙能X線吸收法(DXA)的測定值是目前全世界公認的診斷骨質疏松癥的金標準。DXA結果的評估受檢查者的主觀影響較大，限制了在基層大規模的推廣。同時，被檢者在行DXA檢查時必須暴露于放射線環境，限制了部分有禁忌癥的患者的應用。目前，血液中骨代謝相關標志物的敏感性與特異性均不理想。因此，尋找新的、與疾病嚴重程度及進展密切相關的標記物，對骨質疏松的早期診斷和治療將具有重大意義。

疾病發生、發展的驅動基因與環境因素的綜合作用共同調控了機體的代謝重塑。代謝物的變化清晰的反映了生物體病理生理狀態。在許多疾病中，循環代謝小分子能夠促進疾病的早期篩查、預警，以及理解疾病的發生模式。具有將色譜對復雜樣品的高分離能力，與質譜具有高選擇性、高靈敏度相結合的優點，液相色譜-質譜聯用代謝組學分析技術是目前最為常用的檢測組織樣本或體液(血液、尿液、組織液)樣本中廣譜內源性代謝小分子的工具，在越來越多研究中得到應用。采用特定的樣品前處理方法，以及色譜和質譜條件，利用標準品為參照，對物質定性、定量。從而大大提高了檢測的靈敏度、特異度和可重復性，確保代謝物濃度信息不丟失，具有高通量、臨床可操作性和數據可挖掘性。目前，研究證實，不同循環代謝物的組合作為診斷或預后標志物，在許多疾病中具有良好的應用前景，但是，目前在診斷骨質疏松癥中，并沒有找到特別有效的代謝標志物。

發明內容

針對現有技術中存在的上述問題，本發明提供一種骨質疏松癥負離子診斷標志物及其檢測方法，該負離子標志物可準確反應出患者是否患有骨質疏松癥，具有檢測方便、對人體無放射性損傷的優點，可有效解決現有的雙能X線吸收法存在檢測受限的問題。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種骨質疏松癥負離子診斷標志物，該負離子診斷標志物分別為4-羥基脯氨酸和3-[3-(磺氧基)苯基]丙酸。

上述骨質疏松癥負離子診斷標志物在制備骨質疏松診斷試劑盒中的應用。

一種骨質疏松診斷試劑盒，包括上述極性標志物。

上述的骨質疏松癥負離子診斷標志物的檢測方法，包括以下步驟：

(1)取血清樣本，向其中加入甲醇和乙腈的混合溶液，然后依次進行渦旋振蕩、靜置；

(2)將步驟(1)中混合物離心，取上清液，對上清液進行冷凍干燥；

(3)向步驟(2)中冷凍干燥物中加入乙腈和水的混合溶液復溶，然后依次進行渦旋振蕩和離心，取上清液進行液相色譜-質譜聯合檢測即可，其中，液相色譜檢測的色譜柱為：Acquity HSS C18色譜柱。

進一步地，步驟(1)中甲醇和乙腈的混合溶液中甲醇和乙腈的體積比為1:1。

進一步地，步驟(1)中渦旋振蕩3-7min，然后于3-6℃條件下靜置8-12min，然后于于3-6℃條件下4500-5100g的離心力作用下離心15-25min。

進一步地，步驟(3)中乙腈和水的混合溶液中乙腈和水的體積比為1:3。