[發明專利]一種Vero細胞無血清基礎培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 202111543508.2
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114107178A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 王龍;馮慧慧;王猛
• 申請（專利權）人: 無錫多寧生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 許曉琳

本發明提供了一種Vero細胞無血清基礎培養基，包括如下有效成分：基礎組分和重組表皮生長因子，所述基礎組分由以下組分組成：無機鹽、氨基酸及糖類、維生素、微量元素、脂類以及添加組分。其制備方法包括將基礎組分按配比加入適量超純水中混合均勻，用鹽酸調節pH值在7.0～7.4范圍內，加入重組表皮生長因子并混合均勻，加水定容，用氯化鈉調節滲透壓，用濾膜過濾，得到所述Vero細胞無血清基礎培養基。本發明培養基的配置簡便，原料的成本低，含極低的重組表皮生長因子、不含水解物，其穩定性相對較好，適合大規模工業化生產。

技術領域

本發明涉及Vero細胞培養基技術領域，具體涉及一種以基礎組分和重組表皮生長因子組合優化的Vero細胞無血清基礎培養基。

背景技術

血清是為細胞提供生長增殖所需的激素、生長因子等營養物質,但由于不同批次的血清之間存在批間差異,價格昂貴,存在容易被病毒和支原體感染的風險,含有大量成分復雜的蛋白質給細胞產品下游分離純化帶來很大的困難。

Vero細胞(African green kidney cell，Vero cell)是世界衛生組織和我國生物制品規程認可的疫苗生產細胞系。目前已用于多種疫苗的生產。Vero細胞無血清培養已在狂犬病疫苗、呼腸病毒、腎綜合征出血熱疫苗、流行性乙型腦炎疫苗、甲型肝炎疫苗、流感疫苗疫苗等的研發和生產應用。

國外無血清培養基gibco的VP-SFM的價格昂貴，所以迫切需要一款價格低廉、無血清、無動物源、應用于微載體貼壁工藝的Vero細胞無血清基礎培養基。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種針對Vero細胞貼壁工藝的無血清、成分簡單、質量相對可控的Vero細胞基礎培養基。

本發明是采用如下技術方案實現的：

一種Vero細胞無血清基礎培養基，包括如下有效成分：基礎組分和重組表皮生長因子，所述基礎組分由以下組分組成：無機鹽、氨基酸及糖類、維生素、微量元素、脂類以及添加組分。

作為優選的技術方案，所述基礎組分中，無機鹽包括氯化鉀、氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鈉和硫酸鎂；氨基酸及糖類包括天冬酰胺、蛋氨酸、組氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸、精氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、谷氨酸、纈氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、丙氨酸和葡萄糖；維生素包括維生素B6、維生素B1、生物素、維生素B12、泛酸、葉酸、煙酸、核黃素、氯化膽堿和肌醇；微量元素包括氯化銅、氯化鋅、檸檬酸鐵銨、氯化錳和亞硒酸鈉；脂類以及添加組分包括亞油酸，乙醇胺、谷胱甘肽和精胺。

優選的，所述Vero細胞無血清基礎培養基中各組分的含量范圍如下：

無機鹽部分：0.2-2.0g/L氯化鉀、0.01-1.0g/L氯化鈣、0.001-2.0g/L磷酸二氫鈉、1.0-10.0g/L氯化鈉、0.01-2.0g/L硫酸鎂；

氨基酸及糖類部分：0.01-2.0g/L天冬酰胺、0.01-1.0g/L蛋氨酸、0.01-1.5g/L組氨酸、0.01-0.8g/L天冬氨酸、0.01-0.8g/L絲氨酸、0.02-1.0g/L甘氨酸、0.02-0.8g/L精氨酸、0.01-0.5g/L異亮氨酸、0.02-0.8g/L亮氨酸、0.01-2.0g/L谷氨酸、0.02-1.0g/L纈氨酸、0.02-1.2g/L賴氨酸、0.01-0.5g/L苯丙氨酸、0.01-0.6g/L脯氨酸、0.02-1.0g/L蘇氨酸、0.2-0.8g/L谷氨酰胺、0.02-1.0g/L酪氨酸、0.04-0.8g/L丙氨酸、2-10g/L葡萄糖；