[發(fā)明專(zhuān)利]一種IBD卵黃抗體微球及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111539084.2
• 申請(qǐng)日: 2021-12-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114225026A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李自波;高媛媛;李國(guó)輝;姬星宇;黃向麗;何曉蓓;趙自冰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 商丘美蘭生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/42
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/42;A61K36/233;A61K31/715;A61K9/50;A61K47/34;A61P31/14;A61P29/00;A61P37/04
• 代理公司: 鄭州豫鼎知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41178
• 代理人: 郭麗娜

本發(fā)明屬于卵黃抗體制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種IBD卵黃抗體微球及其制備方法。該方法以黃精多糖、IBD卵黃抗體和柴胡精油作為微球內(nèi)相，以聚乳酸?羥基乙酸共聚物作為外相制得。本發(fā)明所制成微球特殊的結(jié)構(gòu)有利于將卵黃抗體和黃精多糖遞呈給免疫活性細(xì)胞，吞噬細(xì)胞吞噬微球，并能破壞微球的殼結(jié)構(gòu)，釋放卵黃抗體和黃精多糖，中和機(jī)體感染的IBD病毒，對(duì)于未感染IBD的雞群起到預(yù)防保護(hù)作用，并使感染IBD發(fā)病的雞群病情迅速控制。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于卵黃抗體制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種IBD卵黃抗體微球及其制備方法。

背景技術(shù)

雞傳染性法氏囊病（IBD）又稱(chēng)雞傳染性腔上囊病，是傳染性法氏囊病毒引起的一種急性、高度傳染性疾病。由于該病發(fā)病突然、病程短、死亡率高，且可引起雞體免疫抑制，仍然是養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染病之一，給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了極大的經(jīng)濟(jì)損失。預(yù)防接種是預(yù)防雞傳染性法氏囊病的一種有效措施，通過(guò)免疫注射產(chǎn)蛋雞，從其生產(chǎn)的蛋黃中提取相應(yīng)的卵黃抗體，用于疾病的預(yù)防和治療，以被廣泛用于臨床。卵黃抗體具有多方面的優(yōu)點(diǎn)：（1）大規(guī)模飼養(yǎng)、自動(dòng)收集和分選雞蛋是常規(guī)技術(shù)，與哺乳動(dòng)物相比，雞的飼養(yǎng)成本更低。（2）用母雞生產(chǎn)抗體造成的損傷非常少，只需要收集雞蛋，而不需要采血，因此對(duì)動(dòng)物造成的應(yīng)激刺激也很少。（3）與哺乳動(dòng)物血清抗體相比，卵黃只含有IgY一類(lèi)抗體，因此非常易于通過(guò)沉淀技術(shù)進(jìn)行純化。（4）一旦經(jīng)過(guò)純化，IgY可以在4℃穩(wěn)定保存數(shù)年。（5）雞的抗體還可以識(shí)別不同于哺乳動(dòng)物抗體的抗原表位，因此可以形成不同于哺乳動(dòng)物抗體的抗體庫(kù)。（6）與IgG相比，IgY不會(huì)激活哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)或者在胃腸道中與哺乳動(dòng)物的Fc受體結(jié)合導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。

雖然卵黃抗體的優(yōu)點(diǎn)非常突出，但是現(xiàn)在的傳染性法氏囊病卵黃抗體還存在一些不足，例如，注射量大，易產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。針對(duì)傳染性法氏囊病卵黃抗體的研究一直在不斷進(jìn)行。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種IBD卵黃抗體微球，這種卵黃抗體微球能夠有效提高卵黃抗體的免疫效力，減少注射量。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種IBD卵黃抗體微球的制備方法，包括以下步驟：

1）將黃精多糖和IBD卵黃抗體混合攪拌均勻；

2）將步驟1）得的溶液物料加入到柴胡精油中，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)乳化，作為微球內(nèi)相；

3）將聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）溶于二氯甲烷中得到溶液作為微球外相，溶液中聚乳酸-羥基乙酸共聚物的濃度為0.5-2%；

4）將步驟2）溶液與步驟3）溶液以1:3-10的比例混合得到混合液，向混合液中加入表面活性劑PEG400均質(zhì)，以10000 r/min速率進(jìn)行高剪切乳化，增加內(nèi)相和外相的親和性，使內(nèi)相有效成分被包封于PLGA外相內(nèi)；

5）步驟4）的混合液置于磁力攪拌器中，在轉(zhuǎn)速250 r/min的室溫條件不斷攪拌得到微球，使乳滴中的二氯甲烷完全揮發(fā)，離心得到微球，微球用蒸餾水洗滌3次除去多余的有機(jī)溶劑得到IBD卵黃抗體微球。

所述步驟2）中每10ml柴胡精油中含有3-7g黃精多糖和5ml IBD卵黃抗體。

所述步驟5）制得的IBD卵黃抗體微球的粒徑為25-1000nm。

本發(fā)明中的柴胡精油也叫柴胡揮發(fā)油，制備時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法對(duì)粉碎的柴胡進(jìn)行蒸餾提取，收集蒸餾液，取上層揮發(fā)油。

本發(fā)明中使用的IBD卵黃抗體采用以下方法制得：

a、抗原制備：采集具有典型IBD病理變化的法氏囊和脾臟，剪碎后高速攪拌勻漿，離心取上清液，加入0.3%甲醛，37℃溫箱中滅活48小時(shí)；