[發明專利]一種Jo-1抗原生物素化的方法及抗Jo-1抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202111524670.X
• 申請日: 2021-12-14
• 公開（公告）號: CN114316016A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 崔利歌;徐璐;孔巧蕓;李裕明;喻露;岳凡;金陽陽
• 申請（專利權）人: 江蘇浩歐博生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/107;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 周敏

本發明提供一種Jo?1抗原生物素化的方法及抗Jo?1抗體檢測試劑盒。為了解決現有技術中由于Jo?1抗原生物素化效率低而導致的抗Jo?1抗體檢測試劑盒臨床符合率較低的問題，本發明將Jo?1抗原的巰基轉化成氨基得到處理后的Jo?1抗原，然后將所述的處理后的Jo?1抗原與生物素偶聯得到生物素標記的Jo?1抗原。本發明首次提出將Jo?1抗原的巰基轉化成氨基的工藝，以此增加Jo?1抗原表面氨基的數量，在Jo?1抗原生物素化時，提高Jo?1抗原與生物素反應的概率，增加生物素化效率，此方法原料易得，方法簡單，成本低。

技術領域

本發明屬于抗體檢測領域，具體涉及一種Jo-1抗原生物素化的方法及抗Jo-1抗體檢測試劑盒。

背景技術

抗Jo-1抗體常見于多發性肌炎(Polymyositis；PM)，陽性檢出率可達40％～50％；在PM于DM(皮肌炎)重疊的患者中，抗Jo-1抗體的陽性檢出率為25％；在單獨DM患者中，抗Jo-1抗體的檢出率不足10％；在其他自身免疫性疾病中，抗Jo-1抗體為陰性，因而抗Jo-1抗體對診斷PM具有特異性。此外，在PM與硬皮病重疊的患者中，抗Jo-1抗體的陽性率檢出率可高達85％；在進行性系統性硬化(PSS)與PM重疊的患者中，抗Jo-1抗體的陽性率檢出率約為25％，在PM伴肺間質纖維化患者中，抗Jo-1抗體陽性率可達60％。

目前對于抗Jo-1抗體的檢測方法已有報道，對于此病的檢測方法主要為間接免疫熒光法和酶聯免疫吸附法，但這些方法都存在著不足之處。間接免疫熒光法在分析結果時無法根據分子量的大小區分非特異性反應；操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫院難以推廣，同時，不適用于樣本量較大的實驗室和診斷醫院；熒光測定中的本底較高，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難；結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足。酶聯免疫吸附法檢測范圍和靈敏度都比較低；檢測時間較長，完成一個測試一般需要2個小時以上，不能完全滿足臨床上的快速診斷的需求；不能隨機進樣檢測，檢測結果存在滯后性；儀器檢測多數只能定性判斷樣本中被測抗體，檢測結果不能監視病情。

為了解決上述問題，在之前的研究中，我們開發了一種測定抗Jo-1抗體的磁微粒化學發光檢測試劑盒(CN109085343A)，通過在抗原中加入一定量的tRNA和RNA酶抑制劑，通過tRNA以及tRNA與Jo-1抗原結合形成的復合物，增加Jo-1抗體的檢測靈敏度，相比之前的試劑盒，具有穩定性好、靈敏度高、重復性好等優點。但是，tRNA和RNA酶抑制劑成本較高且保存條件要求高，而專利CN109085343A和目前其他試劑盒中抗原生物化的過程，都是將已活化的生物素與抗原蛋白上的氨基反應，將生物素和蛋白質連接在一起，隨著研究的深入，我們發現在Jo-1抗原的生物化過程中，直接對Jo-1抗原生物素化，效率較低，不能達到一個理想的水平，從而導致試劑盒的臨床符合率還不夠理想。因此，需要開發一種能夠提高Jo-1抗原生物素化的方法，在不使用tRNA和RNA酶抑制劑時，也能提高試劑盒的臨床符合率。

發明內容

本發明的目的是提供一種高效的Jo-1抗原生物素化方法。

本發明的另一目的是提供一種不使用tRNA和RNA酶抑制劑也能夠具有高的臨床符合率的抗Jo-1抗體檢測試劑盒。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種Jo-1抗原生物素化的方法，將Jo-1抗原的巰基轉化成氨基得到處理后的Jo-1抗原，然后將所述的處理后的Jo-1抗原與生物素偶聯得到生物素標記的Jo-1抗原。

發明人首次在Jo-1抗原生物素化方法中增加Jo-1抗原處理步驟，將Jo-1抗原的巰基轉化成氨基，以此增加氨基的數量，提高Jo-1抗原與生物素接觸反應的概率，從而提高Jo-1抗原生物素化效率。

本發明中，4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽簡稱磺基SMCC；4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯簡稱SMCC。