[發明專利]一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18及其應用

有效

• 申請號: 202111521774.5
• 申請日: 2021-12-13
• 公開（公告）號: CN114410646B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 明鳳;徐慶于;李東世;何國仁;張棲語
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/02;A01H6/62
• 代理公司: 上海宛林專利代理事務所(普通合伙) 31361
• 代理人: 徐靜杰

本發明提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18及其應用。本發明第一方面提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18，具有以下核苷酸序列中的一種：1)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；2)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列通過一個或幾個核苷酸的取代、缺失、或添加衍生產生的核苷酸序列；3)與SEQ?ID?NO.1具有至少80％同源性的核苷酸序列。本發明通過基因工程的手段有效調控了蝴蝶蘭花器官的發育，使三唇瓣蝴蝶蘭的假唇瓣變成真唇瓣，從而利于昆蟲對植物的傳粉，同時也為蝴蝶蘭的花型育種提供了重要的基礎。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18及其應用。

背景技術

隨著人們生活水平的提高，花卉植物越來越受到人們的喜愛，人們對于不同形狀的花卉有了更高的要求。為了提供更具有觀賞價值和收藏價值的奇特花卉和名貴花卉，人們越來越注重研究花卉的發育機制。目前蘭科植物有超過20000多種，是植物界包含種類最多的科之一。蘭花花型包括外輪的三片花萼，內輪的兩片花瓣以及由花瓣特化成各種形式的唇瓣，此外蘭花具有雄蕊和雌蕊融合而成的合蕊柱，這種高度分化的花結構為研究蘭花器官提供了良好的條件，研究觀賞花卉發育機制對蘭花發育模型的挖掘具有廣泛的應用前景。

發明內容

本發明提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18，用于提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因，使其具有獨特的觀賞和應用價值。

本發明第一方面提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的基因PeARF18，所述基因具有以下核苷酸序列中的一種：

1)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；

2)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列通過一個或幾個核苷酸的取代、缺失、或添加衍生產生的核苷酸序列；

3)與SEQ?ID?NO.1具有至少80％同源性的核苷酸序列。

本發明第二方面提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的蛋白，所述蛋白由本發明第一方面提供的基因編碼得到。

本發明第三方面提供一種重組載體，所述重組載體包含本發明第一方面提供的核苷酸序列。

進一步地，所述重組載體為CymMV病毒。

本發明第四方面提供一種重組轉化體，所述重組轉化體包含本發明第三方面提供的重組載體。

進一步地，所述重組轉化體為農桿菌。

本發明第五方面提供本發明第一方面提供的基因在調控蝴蝶蘭花器官發育中的應用。

本發明第六方面提供一種調控蝴蝶蘭花器官發育的方法，對所述蝴蝶蘭沉默如本發明第一方面提供的核苷酸序列。

進一步地，將所述核苷酸序列連接到CymMV病毒質粒上面得到重組載體，然后將所述重組載體轉入農桿菌，得到重組轉化體，使用所述重組轉化體侵染蝴蝶蘭。

進一步地，將所述重組轉化體在含有100μM的乙酰丁香酮和50μg/ml卡那霉素的LB培養基中培養；

培養結束后在含有100μM乙酰丁香酮和50μg/ml卡那霉素的LB培養基中繼代培養，直到OD600達到0.8-1.0；離心去除上清液，使細胞沉淀重懸得到轉化液，將所述轉化液注射到無病毒的蝴蝶蘭葉片與花序中。

本發明通過基因工程的手段有效調控了蝴蝶蘭花器官的發育，使三唇瓣蝴蝶蘭的假唇瓣變成真唇瓣，從而利于昆蟲對植物的傳粉，同時也為蝴蝶蘭的花型育種提供了重要的基礎。

附圖說明

圖1為現有技術提供的野生型三唇瓣小蘭嶼蝴蝶蘭的表型；

圖2為本發明實施例提供的PeARF18的保守結構域預測圖；