[發明專利]一種養殖動物的枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法

在審

• 申請號: 202111508289.4
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114032200A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 陳宏;白海;李祥;宋春玲
• 申請（專利權）人: 安徽天富來生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A23K10/18;C12R1/125
• 代理公司: 深圳紫晴專利代理事務所(普通合伙) 44646
• 代理人: 雒盛林

本發明涉及一種養殖動物的枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法，包括以下具體步驟：采集仔豬糞便樣品10份，以1:10的比例加入無菌水中，制備成懸液，殺死大部分不耐熱的菌株，初步獲得耐熱性好的芽孢桿菌；將培養好的營養肉湯進行梯度稀釋并涂布，涂布營養瓊脂平皿長出單菌落30?300個之間，選取差異較大的單菌落，用滅菌牙簽將差異較大的單菌落培養于培養皿中；測試：將培養24h的芽孢桿菌液離心、收集上清，取無菌96孔培養板，按1:1比例加入芽孢桿菌上清液及病原菌液，共同孵育6h；結合抑制病原菌的情況分析。本發明優點：對畜禽腸道條件性致病菌大腸桿菌病、沙門氏菌病、產氣莢膜梭菌有顯著抑制作用，并對益生菌的繁殖有促進作用。

技術領域

本發明涉及技術飼料添加劑領域，具體是指一種養殖動物的枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法。

背景技術

由于動物疾病頻繁爆發，混合感染和耐藥菌株等不斷出現，養殖業普遍采用長期添加抗生素或治療藥物等來控制沙門氏菌、大腸桿菌等有害菌，導致食品藥物殘留、細菌耐藥性增強甚至導致超級細菌的產生。

畜牧業作為動物食品主要來源，為人類提供日常所需的蛋白質等營養物質，但由于動物疾病多發，容易感染病毒和細菌，導致動物死亡或抗生素濫用。常見的疾病主要有乳腺炎、腹瀉、腦膜炎、關節炎、心內膜炎、肺炎和敗血癥等，常見的有害菌主要有大腸桿菌、副嗜血桿菌、沙門氏菌及產氣莢膜梭菌等。由于規模化和集約化養殖發展迅速，隨之出現了飼養密度過大、養殖舍環境通風不良等一些養殖環境質量下降的問題，由條件性致病細菌引起的各種畜禽消化道疾病對養殖的困擾也越來越突出。芽孢桿菌通常是不致病或者是機會致病菌，其中枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌是“公認安全(GRAS)”的細菌，常用于臨床畜禽、水產養殖中傳染病的防治及食品的防腐保藏等方面，具有促進動物生長，無藥殘、綠色環保的飼料添加劑。該類產品以內生孢子形式存在，具有較多的優點:①耐酸、耐鹽、耐高溫(I00℃)及耐擠壓，因而在飼料的加工制粒、通過動物胃酸環境等過程中具有較高的穩定性；②具有很強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，對植物性碳水化合物具有較強的降解能力，能降解植物性飼料中某些復雜的化合物，③產生具有拮抗腸道致病菌能力的多肽類細菌素物質。而一般的枯草芽孢桿菌不產生細菌素，無法直接針對產氣莢膜梭菌等有害菌起抑制所用，從而難以達到理想的效果。而近期許多重要研究發現，能夠產生細菌素的枯草芽孢桿菌具有改善動物健康，降低腸道病原菌數目以及抗感染的作用，是潛在的抗生素替代品。

經過多年的技術開發和積累，益生菌微生態制劑成為替代抗生素的首選。微生態制劑自身分泌如細菌素等多種抗菌物質，拮抗病原微生物的生長，調節動物免疫，無耐藥性、無殘留，深受人們歡迎。其中芽孢桿菌更是使用最為廣泛的一種微生態制劑。但是，不同芽孢桿菌菌株的益生性能差異較大。

發明內容

本發明一種養殖動物的枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法，其對畜禽腸道條件性致病菌大腸桿菌病、沙門氏菌病、產氣莢膜梭菌有顯著抑制作用，并對益生菌的繁殖有促進作用。

為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案為：

一種養殖動物的枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法，包括以下具體步驟：

1)采集仔豬糞便樣品10份，以1:10的比例加入無菌水中，振蕩、混勻，制備成懸液，經80℃水浴處理10min，殺死大部分不耐熱的菌株，初步獲得耐熱性好的芽孢桿菌；

2)將培養好的營養肉湯進行梯度稀釋并涂布，涂布營養瓊脂平皿長出單菌落30-300個之間，選取差異較大的單菌落，用滅菌牙簽將差異較大的單菌落培養于培養皿中,37℃，200rpm，震蕩培養24h；

3)測試：將培養24h的芽孢桿菌液離心、收集上清，取無菌96孔培養板，按1:1比例加入芽孢桿菌上清液及病原菌液，在37℃,200rpm條件下共同孵育6h；

4)計算抑菌率，公式如下：