[發明專利]重組酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的應用

有效

• 申請號: 202111508069.1
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114196653B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發明（設計）人: 范新炯;劉艷艷;張藝馨
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 合肥市科融知識產權代理事務所(普通合伙) 34126
• 代理人: 李慧

本發明適用于酶工程技術領域，提供了重組酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的應用，所述重組酯酶Est1260由酯酶基因est1260重組表達得到，所述重組酶酯Est1260的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2所示，本發明將酯酶基因est1260序列進行異源表達，通過對陽性克隆子的誘導表達得到重組酶酯，通過測定其應用時發現重組酯酶對尼泊金酯包括MeP、EtP、PrP、BuP有強降解作用。因此在去除尼泊金酯殘留方面有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于酶工程技術領域，尤其涉及重組酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的應用。

背景技術

尼泊金酯是一類以烷基取代基從甲基到丁基或芐基的對羥基苯甲酸酯，包括尼泊金甲酯(MeP)、尼泊金乙酯(EtP)、尼泊金丙酯(PrP)、尼泊金丁酯(BuP)。主要用作有機合成、食品、化妝品、醫藥的殺菌防腐劑，也用作于飼料防腐劑，是國際上公認的廣譜性高效食品防腐劑。但是其作為一種環境內分泌干擾物對生態環境和人類健康所產生的不利影響越來越受到關注。因此，在自然分解能力無法滿足人類安全需求的形勢下，尋找高效降解尼泊金酯的新方法，降低尼泊金酯的毒負作用已成為一個重要研究領域。

生物法尤其是生物酶在處理尼泊金酯殘留問題上具有處理簡便、安全高效、應用范圍廣且無二次污染等優點，日益受到重視。因此，急需一種具有優良性能的生物催化劑尼泊金酯降解酶。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供重組酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的應用，旨在解決上述背景技術中提出的問題。

本發明實施例是這樣實現的，重組酶酯Est1260在降解尼泊金酯上的應用，所述重組酯酶Est1260由酯酶基因est1260重組表達得到，所述重組酶酯Est1260的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2所示。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述酶酯基因est1260的核苷酸序列為SEQID?NO.1所示。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述重組酶酯Est1260的制備方法包括以下步驟：

用酶酯基因est1260構建的重組載體轉化宿主細胞，得到重組菌；

經IPTG誘導，得到重組酯酶Est1260。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述重組載體為pET-32a(+)。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述宿主細胞為大腸桿菌E.coli?BL21(DE3)。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述IPTG終濃度為10-1000μM，誘導溫度為16～30℃。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述尼泊金酯為MeP、EtP、PrP或BuP。

作為本發明實施例的一個優選方案，所述降解溫度為0-40℃；降解時的pH為6.47-9.18。

本發明將酯酶基因est1260序列進行異源表達，通過對陽性克隆子的誘導表達得到重組酶酯，通過測定其應用時發現重組酯酶對尼泊金酯包括MeP、EtP、PrP、BuP有強降解作用。因此在去除尼泊金酯殘留方面有廣闊的應用前景。

附圖說明

圖1為重組酶酯對底物MeP、EtP、PrP、BuP降解液相色譜圖。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

以下結合具體實施例對本發明的具體實現進行詳細描述。

實施例

1、基因片段的克隆