[發(fā)明專利]一種篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111507320.2
• 申請(qǐng)日: 2021-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114164255A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/66
• 分類號(hào): C12Q1/66;C12N15/85;C12N15/12;C12N15/65;C12N5/10
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 曹振中

1.一種篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法， 其特征在于：包含以下步驟：

S1：在D2R受體的羧基端融合Nano熒光素酶的大亞基LgBIT；在NR2B的羧基端融入Nano熒光素酶低親和力的小亞基SmBIT；

S2：利用脂質(zhì)體將D2R-LgBIT和NR2B-SmBIT表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞，并在48小時(shí)后，洗脫細(xì)胞并計(jì)數(shù)；然后將細(xì)胞分別利用移液器接種到384孔板，離心沉淀細(xì)胞；

S3：將有生物學(xué)活性的化合物以適當(dāng)?shù)臐舛认♂尩紻MEM中，每孔加入5微升化合物，讓化合物與D2R-NR2B二聚體充分結(jié)合；

S4：30分鐘后，在每孔細(xì)胞加入20微升Nano熒光素酶底物加入熒光素酶底物，室溫孵育15分鐘后利用高速酶標(biāo)儀讀板。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，其特征在于：所述S2中細(xì)胞數(shù)的數(shù)值范圍為2000-20000個(gè)/20微升/孔；讀板時(shí)間為2-30分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，其特征在于：所述S2中細(xì)胞數(shù)為2000個(gè)/20微升/孔；讀板時(shí)間為10分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，其特征在于：所述DMSO的濃度為0.5%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，其特征在于：所述S4中，化合物的終濃度為20μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，其特征在于：所述S4中室溫孵育15分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選D2R與NR2B相互作用阻斷劑的方法，在D2R受體的羧基端融合Nano熒光素酶的大亞基LgBIT；在NR2B的羧基端融入Nano熒光素酶低親和力的小亞基SmBIT。