[發明專利]研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法

在審

• 申請號: 202111506714.6
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114277083A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 郭蓮;申雨檬
• 申請（專利權）人: 南京美新諾醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/24
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 王函;余艷

1.一種研究藥物的腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、糞便收集；

S2、加入勻漿液，浸泡、勻漿；

S3、離心，取上清液，得到腸道菌群溶液；

S4、將受試物溶液、溶解所述受試物的溶劑、奧美拉唑溶液分別加入一定量的所述步驟S3得到的腸道菌群溶液中制備獲得受試物組、空白對照組和陽性對照組；

S5、將所述受試物組、所述空白對照組和所述陽性對照組放入厭氧培養密封盒，再放入二氧化碳培養箱進行培養，培養溫度為37℃；

S6、到需要的培養時間點后，取出，并加入有機試劑停止厭氧培養；

S7、所得樣品進行LC-MS/MS分析。

2.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S1為收集2小時以內的新鮮糞便。

3.如權利要求2所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S1中：所述糞便來自SPF級試驗動物；所述SPF級試驗動物的數量為2-4只。

4.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S2中的勻漿液為磷酸鉀鹽緩沖液。

5.如權利要求4所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S2中：所述磷酸鉀鹽緩沖液的濃度為0.1M±0.05M，pH為7.4±0.2；采用8-10倍所述糞便體積的所述磷酸鹽緩沖液浸泡，采用勻漿機勻漿。

6.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S3中：離心條件為1800-2200g離心速度下離心8-15分鐘。

7.如權利要求6所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S3中：離心條件為2000g離心速度下離心10分鐘。

8.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S4中：所述受試物溶液和所述溶解受試物的溶劑以0.8％-1.5％的比例加入所述一定量的步驟S3得到的腸道菌群溶液；所述奧美拉唑溶液加入所述一定量的步驟S3得到的腸道菌群溶液后的終濃度為8-15μM。

9.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S5中：所述厭氧培養密封盒中含有配套的氧氣消耗和二氧化碳生成材料。

10.如權利要求1所述的研究藥物腸道菌群代謝的體外模型的構建和分析方法，其特征在于，所述步驟S6中：所述有機試劑選自甲醇、乙腈中的一種或多種。