[發明專利]花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202111505223.X
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114181321B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 李昀;齊鑫;溫海深;張凱強;董夕夢;張靜茹;王孝杰;陳基偉
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/50;C12N15/12;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/18;A61P21/00;C12R1/19
• 代理公司: 焦作加貝專利代理事務所(普通合伙) 41182
• 代理人: 任昕

1.一種花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白，其特征在于：包括：FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列，以及連接到所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列的N端的標簽肽段；

所述標簽肽段包括六聚組氨酸標簽和促溶標簽小泛素相關修飾蛋白（SUMO）；

所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列分別為SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3；

所述小泛素相關修飾蛋白（SUMO）的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.4。

2.根據權利要求1所述的花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白，其特征在于：所述花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的氨基酸序列分別為SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6和SEQ?IDNO.7。

3.編碼如權利要求1或2所述的花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的基因，其特征在于：包括：編碼FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸的基因序列，以及連接到所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸基因序列的5'端的標簽肽段的編碼基因序列，所述標簽肽段的編碼基因序列包括組氨基酸標簽編碼基因序列和促溶標簽編碼基因序列。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述編碼FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸對應的核苷酸序列分別為SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.10。

5.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述編碼FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白對應的核苷酸序列分別為SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.12和SEQ?ID?NO.13。

6.一種用于表達如權利要求1或2所述的花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的表達載體，其特征在于：包含如權利要求5所述的花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的編碼基因和骨架質粒，所述骨架質粒為pET-28a（+）。

7.一種用于表達如權利要求1或2所述的花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的重組工程菌，其特征在于：包括如權利要求6所述的表達載體。

8.根據權利要求7所述的重組工程菌，其特征在于：所述重組工程菌的宿主菌選自BL21（DE3）。

9.一種花鱸FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的制備方法，其特征在于：其包括如下步驟：

1）構建如權利要求5所述的FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白編碼基因，然后連到到骨架質粒上構建得到FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白的表達載體；

2）將所述表達載體轉化到宿主菌中，誘導表達FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白；

3）基于所述FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白中的組氨酸標簽親和層析分離得到FGF6A、FGF6B以及FGF18重組蛋白。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟1）中，所述編碼FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸對應的核苷酸序列分別為SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9和SEQ?IDNO.10。

11.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟1）中，所述骨架質粒為pET-28a（+）。

12.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟2）中，所述宿主菌選自BL21（DE3）。