[發明專利]一種用于黑色茶花雜種鑒定的SSR標記引物及應用

有效

• 申請號: 202111503455.1
• 申請日: 2021-12-09
• 公開（公告）號: CN114150083B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 李辛雷;張瑩;范夢龍
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 重慶晶智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

1.SSR標記引物在鑒定黑色茶花雜種中的應用，所述引物為：

引物編號：SSR31，上游引物：5′- CAAGGCAGAGTAGGCTGAGG -3′，下游引物：5′-AAAAGGGAAGGGGAAAGTCA -3′，重復單元：(AGC)7，片段大小：212～273；

引物編號：SSR48，上游引物：5′- GTTGGAGGTTTTTCAGCCAC -3′，下游引物：5′-ATTGAAAGTCGCTGCTTCGT -3′，重復單元：(CCG)7，片段大小：249～300；或

引物編號：SSR250，上游引物：5′- ACCTCCAGCTTCCATCAGAA -3′，下游引物：5′-ATCTTGACGGGCGTAACATC -3′，重復單元：(CCG)5，片段大小：261～315。

2.采用權利要求1所述的引物鑒定黑色茶花雜種的方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1，DNA提取： 將黑色茶花雜種及其親本葉片加液氮研磨后提取DNA，分光光度計檢測DNA濃度和純度，0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質量；

步驟2，SSR擴增：利用所述的引物，以黑色茶花雜種及其雜交親本DNA為模板進行SSR擴增；

步驟3，對擴增產物采用Qsep100全自動核酸蛋白分析系統進行電泳分離檢測和片段大小測定；

步驟4，對電泳結果分析：對SSR檢測結果進行峰圖分析及等位基因的讀取和分析，根據峰值圖，檢測到黑色茶花雜種具有母本及父本擴增譜帶，據此判斷其為真雜種。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟1中提取DNA是按北京艾德萊生物科技有限公司CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒的提取方法提取。

4.如權利要求2或3所述的方法，其特征在于：步驟2中SSR擴增反應在Veriti 96-WellThermal Cycler上進行，步驟2中25 μL反應體系：含100 ng的模板DNA 1.5 μL，2×TSINGKEMaster Mix 12.5 μL，10 mmol?L-1引物2 μL，超純水9 μ；PCR擴增程序：94 ℃預變性5min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃延伸9 min。