[發明專利]一種89

在審

• 申請號: 202111498846.9
• 申請日: 2021-12-09
• 公開（公告）號: CN114107191A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 秦天;許波華;周紹聯;邵一飛;王舒哲;呂玉鵬
• 申請（專利權）人: 益諾思生物技術南通有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C07B59/00;C07D215/30
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 呂學辰;黃益澍

本發明公開了一種⁸⁹Zr標記人臍帶間充質干細胞hMSCs的方法，所述方法包含的步驟為：將待標記hMSCs細胞與前體⁸⁹Zr?oxine混合，孵育，得到⁸⁹Zr?hMSCs細胞。本發明的同位素細胞標記方法標記的效率更高，同位素流出率低，投入產出比更高，并降低DMSO了對細胞的影響。移植放射性同位素⁸⁹Zr標記的hMSCs在體內分布定量檢測時，靈敏度高，檢測限低、可以微量檢測。

技術領域

本發明涉及核醫學技術領域，具體涉及一種⁸⁹Zr標記人臍帶間充質干細胞的方法。

背景技術

人臍帶間充質干細胞(hMSCs)是一種能分化成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞的多能干細胞。其具有強大的增殖能力，且參與構成造血微環境，因此被廣泛應用于組織工程，細胞治療和基因治療。目前，人臍帶間充質干細胞作為一個研究熱點被廣泛應用于再生醫學和組織工程，特別是在骨、心血管和神經系統等疾病的領域。眾所周知，干細胞治療需要將干細胞移植到患者體內，因此確認干細胞在體內的遷移路徑對判斷干細胞移植的治療效果至關重要。

目前常規的用于hMSCs體內分布定量研究的方法是解剖動物取樣后用q-PCR的方式檢測。但是該方法不夠靈敏，檢測限比較高，做不到微量檢測。

放射性同位素標記技術能夠在活體中對干細胞移植后組織分布和定量進行監測，該技術主要原理是移植攜帶放射性同位素的干細胞后用單光子發射計算機斷層成像術(SPECT)或正電子發射體層掃描(PET)在體掃描，根據各組織器官的放射活性比例可以確定干細胞在體內的數量分布。

目前有¹¹¹銦(¹¹¹In)、^99m锝(^99mTc)和⁸⁹鋯(⁸⁹Zr)等核素用于細胞標記研究。其中，⁸⁹Zr作為常用的PET核素，半衰期為78.4小時，可以連續追蹤細胞至少14天，非常適合用來標記細胞。

發明內容

本發明要解決的技術問題之一是，針對現有技術中hMSCs體內分布定量的測定方法存在靈敏度低、檢測限高、需要解剖動物取樣之后才能檢測等缺點，提供了一種通過放射性同位素⁸⁹Zr標記hMSCs，借助PET對hMSCs在體內的分布和遷移示蹤，從而對其進行定量檢測的方法。該方法檢測靈敏度高，檢測限低，可以活體成像。

本發明要解決的技術問題之二是，現有技術中使用的細胞同位素標記的方式存在標記效率低、同位素流出率高、DMSO對細胞的影響大等缺點。而且，現有技術中的細胞同位素標記的方式以實驗員的手工操作為主，實驗場景涉及化學合成、細胞培養等多種場景切換，時間漫長且難以做到方方面面的放射性防護。

針對上述技術問題，本發明提供的技術方案為：一種⁸⁹Zr標記人臍帶間充質干細胞hMSCs的方法，所述方法包含的步驟為：將待標記hMSCs細胞與前體⁸⁹Zr-oxine混合，孵育，得到⁸⁹Zr-hMSCs細胞。

在本發明一優選實施方案中，所述待標記hMSCs細胞與所述前體⁸⁹Zr-oxine混合后，所得到的混合液中DMSO的體積百分比不超過總體積的0.5％。

如技術方案所述的方法，所述待標記hMSCs細胞的重懸方式可為本領域常規，例如，使用DPBS重懸，或者可用含蛋白的HEPES重懸。

在本發明一具體實施方案中，使用含1～5％(v/v)人血白蛋白的HEPES重懸。

本發明中所用1～5％(v/v)的人血白蛋白為使用10～20mM HEPES將20％(v/v)的人血白蛋白(本領域常規)稀釋后得到。