[發明專利]一種微藻的固定化方法及其應用

在審

• 申請號: 202111497568.5
• 申請日: 2021-12-09
• 公開（公告）號: CN113999839A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 王勇;于梟燕;趙國群
• 申請（專利權）人: 河北科技大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/084;C12N1/12;C02F3/32;C12R1/89;C02F101/30
• 代理公司: 石家莊科誠專利事務所(普通合伙) 13113
• 代理人: 張紅衛;高春洋

1.一種微藻的固定化方法，其特征在于，該方法包括依次進行的以下步驟：

S1.微藻的培養

將微藻進行高密度培養至對數期，得微藻藻液A；

S2.固定化微藻

取藻液A，離心棄上清液，得菌泥F，將菌泥F和四氧化三鐵納米顆粒加入到滅菌后的PVA水溶液中混勻后置于96孔板內，依次進行冷凍、解凍、清洗，即得所述固定化微藻。

2.根據權利要求1所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟S1中，所述微藻為蛋白核小球藻、魚腥藻、小單歧藻；

所述高密度培養，是將無菌藻細胞于23～30℃、光照強度為2000～2800lux、光照周期為24h：0h明暗比的條件下，在BG11液體培養基中培養至對數生長期，得微藻藻液A。

3.根據權利要求2所述的微藻的固定化方法，其特征在于，所述BG11液體培養基以重量份數計包括：100～200份硝酸鈉、3～5份磷酸氫二鉀、6～9份硫酸鎂、3～4份氯化鈣、0.5～0.7份檸檬酸銨、0.5～0.7份檸檬酸鐵銨、0.1～0.2份乙二胺四乙酸二鈉、1～3份碳酸鈉和100～300份A5培養液。

4.根據權利要求3所述的微藻的固定化方法，其特征在于，所述A5培養液，以重量份數計包括：2～3份硼酸、1.5～2份氯化錳、0.2～0.3份硫酸鋅、0.3～0.5份鉬酸鈉、0.05～0.1份硫酸銅和0.03～0.09份硝酸鈷。

5.根據權利要求1所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟S2中，所述四氧化三鐵納米顆粒的制備方法是按照以下步驟依次進行的：

SⅠ.將醋酸鈉溶解于乙二醇中，水浴加熱，得分散液B；

SⅡ.將FeCl₃·6H₂O和檸檬酸三鈉溶解于乙二醇中，得溶液C；

SⅢ.將溶液C注入分散液B中，水浴加熱，得溶液D；

SⅣ.對溶液D進行加熱加壓、冷卻，得固體E，將固體E清洗、干燥，即得所述四氧化三鐵納米顆粒。

6.根據權利要求5所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟SⅠ中，所述醋酸鈉與乙二醇的重量體積比為2～3g:20mL；

所述水浴加熱，溫度為35～45℃，時間為20～40min；

所述步驟SⅡ中，所述檸檬酸三鈉和FeCl₃·6H₂O的重量比為1:1.5～2。

7.根據權利要求5所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟SⅢ中，

所述水浴加熱，溫度為35～45℃，時間為25～40min。

8.根據權利要求5～7中任一項所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟SⅣ中，所述加熱加壓，是在以聚四氟乙烯為內襯的不銹鋼高溫高壓反應釜中進行的，溫度為180～230℃；

所述冷卻后溫度為20～30℃；

所述清洗，是用乙醇和去離子水依次進行清洗，重復3～5次。

9.根據權利要求1～7中任一項所述的微藻的固定化方法，其特征在于，步驟S2中，所述離心，轉速為3000～6000rpm，時間為3～8min；

所述滅菌，溫度為115～130℃，時間為10～20min；

所述PVA水溶液，濃度為5～15%；

所述小球，半徑為2～4mm，高為6～8mm；

所述冷凍，溫度為-25～-15℃，時間為10～15h；

所述解凍，溫度為3～6℃；

所述清洗，是用無菌水沖洗3～5次。

10.權利要求1～9中任一項所述的微藻的固定化方法制備的固定化微藻的一種應用，其特征在于，所述固定化微藻用于去除淀粉廢水中的有機質。