[發(fā)明專(zhuān)利]一種精液保護(hù)液及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111496761.7
• 申請(qǐng)日: 2021-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114304136A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單麗倩;劉瀾;盧貴梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京大北農(nóng)動(dòng)物保健科技有限責(zé)任公司;韶山大北農(nóng)動(dòng)物藥業(yè)有限公司;北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于改善精液冷凍后品質(zhì)的精液保護(hù)液及其制備方法與應(yīng)用。該精液保護(hù)液含有活性成分，所述活性成分由紅景天多糖、黃芪多糖制成。本發(fā)明精液保護(hù)液具有抗氧化、提高冷凍精子存活率等功效，可有效用于精液冷凍的保護(hù)，能有效提高解凍后精子的質(zhì)膜完整率、精子活力、DNA完整率、頂體完整率等，提高精液冷凍后的品質(zhì)。具有原料來(lái)源廣泛、安全、環(huán)保、制備工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低等諸多優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物遺傳育種領(lǐng)域，特別涉及一種用于改善精液冷凍后品質(zhì)的精液保護(hù)液及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著人工授精技術(shù)的發(fā)展，精液的冷凍保存技術(shù)是哺乳動(dòng)物育種的重要生物技術(shù)手段之一，可以有效降低飼養(yǎng)成本，使精液使用不受時(shí)間、地點(diǎn)和使用對(duì)象的限制，顯著增加優(yōu)良種畜精液的使用時(shí)間和利用率，包括取樣、稀釋、降溫、冷凍等一系列復(fù)雜的過(guò)程。但由于冷凍精液生產(chǎn)存在困難大、冷凍-解凍后活率及受胎率低等諸多原因，導(dǎo)致精液冷凍技術(shù)仍未完全成熟。在冷凍-解凍的過(guò)程中，會(huì)對(duì)精液造成一定損傷，損傷機(jī)制可以分為物理?yè)p傷和化學(xué)損傷。物理?yè)p傷為冷凍產(chǎn)生的冰晶對(duì)細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)產(chǎn)生機(jī)械性損傷。冰晶化導(dǎo)致的溶液效應(yīng)所致一系列損傷為化學(xué)損傷：精子細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡被打破，正常生理代謝產(chǎn)生的活性氧(ROS)大量堆積，無(wú)法經(jīng)反應(yīng)中和，很容易與精子細(xì)胞膜上的磷脂發(fā)生氧化反應(yīng)，還會(huì)降低細(xì)胞內(nèi)酶類(lèi)物質(zhì)的活性，降低運(yùn)動(dòng)性，甚至破壞細(xì)胞核中的DNA，從而導(dǎo)致精子的受精能力下降。

精液保護(hù)液多以減少冰晶和抗氧化為目的，近年來(lái)，現(xiàn)有技術(shù)對(duì)影響凍存精子質(zhì)量的外部條件有了詳細(xì)的研究，可以在冷凍過(guò)程中控制外部條件保持在適宜范圍內(nèi)，將外部條件造成的影響降到最低，關(guān)于內(nèi)部損傷的研究，目前市場(chǎng)上已有的產(chǎn)品以添加卵黃等滲入性保護(hù)劑為主，但存在動(dòng)物源成分復(fù)雜，安全性低等顧慮。多糖具有的抗氧化性、抗衰老和防止細(xì)胞凋亡的特性，其抑制了活性氧的產(chǎn)生，提高了過(guò)氧化物酶的活性，使細(xì)胞質(zhì)膜免受脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，防止細(xì)胞內(nèi)酶類(lèi)外流。使用中藥組合物不僅能夠有效提高冷凍后精子品質(zhì)，還可以有效保障精子的安全，提高精子利用率。與動(dòng)物源滲入性保護(hù)劑相比，傳統(tǒng)的天然植物中藥組合物，具有安全性高，毒性比較低并且殘留少等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種用于改善精液冷凍后品質(zhì)的精液保護(hù)液，具體方案如下：

所述精液保護(hù)液由精液儲(chǔ)存液和中藥組合物制成，所述精液儲(chǔ)存液由葡萄糖、檸檬酸、三羥甲基氨基甲烷、青霉素、鏈霉素制成，中藥組合物由紅景天多糖、黃芪多糖制成。

進(jìn)一步，所述精液儲(chǔ)存液為每1L雙蒸水中含有葡萄糖15～17g，檸檬酸19～21g，三羥甲基氨基甲烷(Tris)34～36g，青霉素、鏈霉素各1×10⁶IU。

進(jìn)一步，所述精液儲(chǔ)存液為每1L雙蒸水中含有葡萄糖16g，檸檬酸20g，三羥甲基氨基甲烷(Tris)35g，青霉素、鏈霉素各1×10⁶IU。

進(jìn)一步，所述中藥組合物為每1L雙蒸水中含有紅景天多糖0.9-1.1g、黃芪多糖0.5-0.7g。

進(jìn)一步，所述中藥組合物為每1L雙蒸水中含有紅景天多糖1.0g、黃芪多糖0.6g。

本發(fā)明還提供了利用所述的精液保護(hù)液進(jìn)行動(dòng)物精液保存的方法，其包括如下步驟：

(1)將采集后的合格精子用精液儲(chǔ)存液稀釋?zhuān)?5℃平衡處理1h，15℃平衡處理1h，期間不定時(shí)混勻；

(2)將精液離心，棄去上清液，加入所述的精液保護(hù)液，調(diào)整精子終濃度為3.2～4.8×10⁸個(gè)/mL，重懸后5℃平衡處理1h；

(3)混勻后的精液灌裝于細(xì)管中，封口，然后將細(xì)管梯度降溫至-6℃，置于液氮上方3cm處熏蒸3min，最后投于液氮，保存。

上述方法中，步驟(2)中調(diào)整精子終濃度優(yōu)選為4×10⁸個(gè)/mL。