[發明專利]一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法

在審

• 申請號: 202111493219.6
• 申請日: 2021-12-08
• 公開（公告）號: CN114410834A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 林旋
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 深圳紫晴專利代理事務所(普通合伙) 44646
• 代理人: 孟蓮

本發明涉及虹彩病毒檢測技術領域，一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法，由以下步驟組成：S1、準備引物組；S2、選取一段DNA模板；S3、向DNA模板中加入DNA聚合酶與核苷酸底物；S4、將S2中的DNA模板及其相關酶進行升溫至94?100℃；S5、將S3中得到的產物降溫至30?36℃；S6、向S4得到產物中加入TaqDNA聚合酶；S7、向S6得到的產物中加入反轉錄試劑與PCR擴增試劑，完成制備。該發明通過先PCR試劑然后將試劑制備成試劑盒，從而方便了對蝦虹彩病毒的檢測，并且在制備PCR試劑的過程中完成了溫度對試劑制備過程中的影響，從而解決了試劑盒的檢測方法需要制備試劑盒時不能檢查出溫度對于試劑的制備影響，進一步提高了PCR試劑的制備率，減少了PCR試劑的浪費，進一步地節約了制備試劑的成本。

技術領域

本發明涉及虹彩病毒檢測技術領域，具體為一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法。

背景技術

虹彩病毒科包括許多從昆蟲和其它一些動物分離的胞漿型DNA病毒，最早發現的虹彩病毒是1954年Xeros在英國劍橋從沼澤大蚊體內分離到的，以后又分別從金龜甲、帶喙伊蚊及蛙和魚中分離出多種虹彩病毒，虹彩病毒寄生在蝦的身上則會形成蝦虹彩病毒，目前對于蝦虹彩病毒的檢測方法有許多，但是在檢測蝦虹彩病毒時常用試劑盒的檢測方法，但是試劑盒的檢測方法需要制備試劑盒時不能檢查出溫度對于試劑的制備影響，為了解決以上問題，現提出一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明一種提供蝦虹彩病毒PCR檢測方法，由以下具體技術手段所達成：

本發明為實現技術目的采用如下技術方案：一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法，由以下步驟組成：

S1、準備引物組；

S2、選取一段DNA模板；

S3、向DNA模板中加入DNA聚合酶與核苷酸底物；

S4、將S2中的DNA模板及其相關酶進行升溫至94-100℃；

S5、將S3中得到的產物降溫至30-36℃；

S6、向S4得到產物中加入TaqDNA聚合酶；

S7、向S6得到的產物中加入反轉錄試劑與PCR擴增試劑，完成制備PCR 試劑后可以大批量的對蝦虹彩病毒進行PCR檢測。

優選的，所述S2中的DNA聚合酶為DNA聚合酶Ⅱ，DNA聚合酶Ⅱ是一種多酶復合體，有5’—3’聚合酶活性中心和3’—5’外切酶活性中心，但沒有5’—3’外切酶活性中心，其催化5’—3’方向合成反應的活性只有DNA 聚合酶Ⅰ的5％。因該酶缺陷的E.coli突變株的DNA復制都正常，所以也不是 DNA復制的主要聚合酶，可能是在DNA的損傷修復中起到一定的作用。

優選的，所述引物組包含5’-ACCTGTAGGCTAGCAAACCAT-3’與5’ -ATAAGCTGAGTCGGACTGAT-3’。

優選的，所述S4中目的雙鏈DNA片段解鏈為單鏈，目的雙鏈DNA片段在 90-100℃的高溫下解鏈為單鏈。

優選的，所述S5中目的基因片段5’與3’端的引物與模板上目的基因的5’、3’端結合，此為“退火”階段，需要在30-36℃的溫度下進行40秒。

優選的，所述S6產生一條新的DMA片段，反轉錄試劑包含緩沖液與反轉錄酶，酶抑制劑，而PCR擴增試劑里包含PCR擴增緩沖液。

有益效果

與現有技術相比，本發明提供了一種蝦虹彩病毒PCR檢測方法及其制備方法，具備以下有益效果：