[發明專利]一種鑒定赭鹿花菌的引物組、試劑盒及其應用在審
| 申請號： | 202111490147.X | 申請日： | 2021-12-08 |
| 公開（公告）號： | CN114182039A | 公開（公告）日： | 2022-03-15 |
| 發明（設計）人： | 田恩靜;謝曉梅;高崇華;鄭媛;段仁和;曹廣乘 | 申請（專利權）人： | 吉林農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385 | 代理人： | 戴嵩瑋 |
| 地址： | 130118 吉林*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒定 赭鹿花菌 引物 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種鑒定赭鹿花菌(Gyromitra infula)的引物組，其特征在于，所述引物組包括：正向外引物F3、反向外引物B3、正向內引物F2、反向內引物B2、正向內引物F1c、反向內引物B1c和環引物LB；
所述正向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述反向外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述正向內引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述反向內引物B2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述正向內引物F1c的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
所述反向內引物B1c的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
所述環引物LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
2.一種鑒定赭鹿花菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物組。
3.權利要求1所述引物組或權利要求2所述試劑盒在鑒定待測樣品是否含有赭鹿花菌中的應用。
4.一種鑒定待測樣品是否含有赭鹿花菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
以待測樣品的基因組DNA為模板，利用權利要求2～3任一項所述試劑盒進行LAMP反應；
若得到擴增產物，則待測樣品中含有赭鹿花菌；若未得到擴增產物，則待測樣品中不含有赭鹿花菌。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述擴增產物的判斷方法包括pH指示法；
當pH指示劑為酚紅時，則鑒定結果為：若反應結果為黃色，則待測樣品含有赭鹿花菌；若反應結果為粉紅色或紅色，則待測樣品不含赭鹿花菌。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述LAMP反應的體系以10μL計，包括5μL 2×LAMP預混液，3μL引物混合液，2μL DNA模板和余量ddH2O。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述引物混合液中不同引物的濃度為：
正向外引物F3和反向外引物B3的濃度分別為0.6μmol/L；
正向內引物F2、反向內引物B2、正向內引物F1c和反向內引物B1c的濃度分別為4.8μmol/L；
環引物LB的濃度為2μmol/L。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述LAMP反應的溫度為65℃；所述LAMP反應的時間為60～90min。
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