[發明專利]微流控芯片、檢測試劑盒和外泌體的檢測方法

在審

• 申請號: 202111488133.4
• 申請日: 2021-12-07
• 公開（公告）號: CN114214177A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 董鳴;肖書婷
• 申請（專利權）人: 廣州國家實驗室
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12M1/00;G01N33/58;G01N33/569
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 張靈莉

本發明涉及一種微流控芯片、檢測試劑盒和外泌體的檢測方法。該微流控芯片包括基體、濾膜、第一電極和第二電極，基體上設置有分離室，濾膜將分離室分隔為第一腔和第二腔，第一電極位于第一腔內，第二電極位于第二腔內，基體上還設有第一進樣口、第二進樣口、第一出樣口和第二出樣口，第一進樣口和第一出樣口分別與第一腔連通，第二進樣口和第二出樣口分別與第二腔連通。采用上述微流控芯片檢測外泌體時靈敏度高，檢測限低，不容易出現假陰性。

技術領域

本發明涉及微流控技術領域，特別是涉及一種微流控芯片、檢測試劑盒和外泌體的檢測方法。

背景技術

外泌體是細胞來源的納米級膜囊泡，在細胞間通訊中起關鍵作用。由于體液中的外泌體與疾病發展密切相關，因此越來越多的疾病將外泌體作為診斷生物標志物。

為了更好地識別外泌體，一些基于親和力的技術，例如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、納米級流式細胞術(NanoFCM)，已被用于量化體液中的外泌體。ELISA是一種在固-液界面上具有緩慢結合動力學的異質反應。ELISA通過使用針對CD63(外泌體上富集的標記物)的捕獲抗體來實現外泌體的特定定量。但ELISA操作費時、繁瑣的缺點使其不適合臨床實施。NanoFCM為外泌體的精確定量和表型分析提供了強大的工具，然而其臨床應用受到定制設備和專業化操作的阻礙，并且在用NanoFCM檢測之前，外泌體必須先用熒光抗體預先標記，然后反復洗滌以去除多余的抗體，這導致下游外泌體分析操作繁瑣和不便。

近年來發現，量子點具有很好的光穩定性、寬的激發光譜和窄的發射光譜及發光效率高等光學特性，是很好的外泌體熒光標記材料。因此，量子點作為外泌體的標記材料在外泌體的檢測中也開始應用。目前一般是通過抗體/適配體修飾的固相載體(例如基體或磁珠)對量子點標記后的外泌體進行固定后清洗，以去除游離量子點，但這種方式得到的外泌體含量往往比實際量低，容易造成假陰性。

發明內容

基于此，有必要提供一種微流控芯片，該微流控芯片能夠改善采用量子點作為熒光標記材料時檢測結果較實際量偏低的問題。

此外，本申請還提供了一種外泌體的檢測方法。

包括基體、濾膜、第一電極和第二電極，所述基體上設置有分離室，所述濾膜將所述分離室分隔為第一腔和第二腔，所述第一電極位于所述第一腔內，所述第二電極位于所述第二腔內，所述第一電極與所述第二電極用于在所述分離室內形成電場，所述基體上還設置有第一進樣口、第二進樣口、第一出樣口和第二出樣口，所述第一進樣口和所述第一出樣口分別與所述第一腔連通，所述第二進樣口和所述第二出樣口分別與所述第二腔連通。

上述微流控芯將電場和濾膜集成到芯片，通過電場和濾膜的作用，帶有負電荷的游離量子點和游離量子點標記抗體從第一腔向電源正極運動并在過濾膜后從第二出樣口流出，量子點標記外泌體濾膜的攔截無法進入第二腔，并在緩沖液的帶動下從第一出樣口后流出，從而實現了去除游離量子點和游離量子點標記抗體的同時量子點標記外泌體均能夠被檢測到，被檢測到的外泌體的含量更接近其真實值，不容易出現假陰性。

在其中一個實施例中，所述第一電極上和/或所述第二電極上設置有多孔水凝膠保護層。

在其中一個實施例中，所述基體包括第一基板和第二基板，所述濾膜固定于所述第一基板與所述第二基板之間，所述第一進樣口和所述第一出樣口均位于所述第一基板上，所述第一基板上設置有第一凹槽，所述第一凹槽與所述第一進樣口連通，所述第一凹槽還與所述第一出樣口連通，所述第一凹槽的槽口朝向濾膜，所述第一基板與所述濾膜圍成所述第一腔，所述第一電極位于所述第一凹槽內；

所述第二進樣口和所述第二出樣口均位于所述第二基板上，所述第二基板上設置有第二凹槽，所述第二凹槽與所述第二進樣口連通，所述第二凹槽還與所述第一出樣口連通，所述第一凹槽的槽口朝向濾膜，所述第二基板與所述濾膜圍成所述第二腔，所述第二電極位于所述第二凹槽內。