[發(fā)明專利]全血DNA提取試劑及提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111487583.1 | 申請日： | 2021-12-07 |
| 公開（公告）號： | CN113913421A | 公開（公告）日： | 2022-01-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳玉景;黃明賢;任輝 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州海貍生物醫(yī)學(xué)工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 常亮 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | dna 提取 試劑 方法 | ||
1.全血DNA提取試劑，其特征在于，包括裂解液、磁珠、異丙醇、洗滌液I、洗滌液Ⅱ、洗脫液和蛋白酶K；
所述裂解液包括：胍類化合物、三羥甲基氨基甲烷、穩(wěn)定劑和表面活性劑；
所述洗滌液I包括：胍類化合物、三羥甲基氨基甲烷、穩(wěn)定劑、表面活性劑和異丙醇；
所述洗滌液Ⅱ為乙醇水溶液；
所述洗脫液包括三羥甲基氨基甲烷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述裂解液由水和1M～10M胍類化合物、10mM～50mM三羥甲基氨基甲烷、5mM～50mM穩(wěn)定劑和1vol％～10vol％表面活性劑組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述洗滌液I由水和0.5M～5M胍類化合物、0.1M～1M氯化鈉、1mM～10mM穩(wěn)定劑、5mM～20mM三羥甲基氨基甲烷、0.5vol％～10vol％表面活性劑和40vol％～80vol％異丙醇組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述胍類化合物為鹽酸胍或異硫酸氰胍中至少一種；所述穩(wěn)定劑選自EDTA或檸檬酸鈉中至少一種；所述表面活性劑選自Tween-20、Triton X-100、NP-40中至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述磁珠為氧化硅羥基納米磁珠。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述洗滌液II為體積分?jǐn)?shù)為60％～100％的乙醇水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全血DNA提取試劑，其特征在于，所述洗脫液的pH值為7.0～9.0，其中，三羥甲基氨基甲烷的濃度為0.1mM～50mM。
8.一種全血DNA的提取方法，其特征在于，包括：
步驟1：將全血、蛋白酶K、裂解液、異丙醇和磁珠混合，孵育反應(yīng)后，分離磁珠；
步驟2：將步驟1分離出的磁珠依次經(jīng)洗滌液I、洗滌液II洗滌后，以洗脫液洗脫后，分離磁珠取上清液，獲得全血DNA溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取方法，其特征在于，全血、蛋白酶K、裂解液、異丙醇和磁珠的體積比為200:10:300:300:10。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取方法，其特征在于，
步驟1所述孵育反應(yīng)的條件包括55℃孵育5min，然后結(jié)合反應(yīng)5min；
步驟2所述洗脫的條件包括55℃孵育5min。
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