[發明專利]一種抗新冠抗體藥物的核心序列

有效

• 申請號: 202111484814.3
• 申請日: 2021-12-07
• 公開（公告）號: CN114195888B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 廖高勇;丁海劍;陳海;張怡
• 申請（專利權）人: 江蘇中新醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

一種抗新冠抗體藥物的核心序列。本發明獲得了全新的抗新冠病毒S蛋白RBD單克隆抗體的核心序列，與現有技術抗新冠單抗的重鏈和輕鏈序列均完全不同。經實驗證實，具有本發明公開的抗新冠病毒S蛋白RBD核心序列的單克隆抗體與新冠病毒S蛋白RBD及其突變體均具有高親和力，可有效抑制新冠病毒S蛋白RBD及其突變體與ACE2的結合，對于新冠假病毒及其突變株假病毒均有明顯的中和活性，可用于制備抗新冠病毒抗體藥物。

技術領域：

本發明涉及抗體藥物制備，特別涉及一種抗新冠抗體藥物的核心序列。

背景技術：

抗病毒單克隆抗體特異性的分子基礎主要來自于它重鏈和輕鏈的高度可變區CDR1、CDR2和CDR3，這些區域是與抗原結合的關鍵部位。

因此獲得單克隆抗體的重鏈和輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3的序列，是制備抗體藥物的關鍵。因為除了此核心區域外，抗體序列的其它位置都是框架區。在CDR區序列不變以及和抗原結合所需的三維結構不受影響的條件下，對框架區進行適當的突變，可以在不影響抗體的藥物活性的同時減弱其免疫原性、提高親和力從而提高抗體的治療效果和安全性。

無論何種形式單克隆抗體，包括具有所需特異性的結合結構域的任意特異性結合因子，可以是單價的或是單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體以及上述抗體的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗體片段和含有抗原結合結構域的任何多肽。其重鏈和輕鏈中的高度可變區CDR1、CDR2和CDR3的序列都是制備抗體的核心和基礎。

已知SARS-CoV-2的S蛋白是通過受體結合結構域(RBD)與宿主受體血管緊張素轉換酶2(ACE2)結合，介導病毒進入宿主細胞。S蛋白所包含兩個功能性亞基S1和S2中，S1負責與宿主細胞受體結合。S1由N端結構域(NTD)和受體結合結構域(RBD)組成，對決定組織嗜性和宿主范圍至關重要。因此，提供可以有效與ACE2競爭結合的單克隆抗體的高度可變區CDR1、CDR2和CDR3的核心序列，有望制備治療新型冠狀病毒相關疾病的藥物。

發明內容

本發明的目的是制備治療新型冠狀病毒相關疾病的藥物，具體是提供可以有效與ACE2競爭結合的單克隆抗體的核心序列。

以下所稱新冠病毒S蛋白RBD指SARS-CoV-2(COVID-19)S?protein?RBD。

本發明獲得了全新的抗新冠病毒S蛋白RBD單克隆抗體的核心序列，與現有技術抗抗新冠病毒單克隆抗體的重鏈和輕鏈序列均完全不同。

本發明提供的抗新冠病毒S蛋白RBD單克隆抗體的核心序列，重鏈和輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3分別是如下所示氨基酸序列的多肽：

重鏈：SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3；

輕鏈：SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6；

根據上述抗新冠病毒S蛋白RBD單克隆抗體的核心序列可以制備有效抑制新冠病毒S蛋白RBD及其突變體的抗體藥物。

具體的，本發明通過如下手段得到了上述抗新冠病毒S蛋白RBD單克隆抗體的核心序列：

A新冠病毒S蛋白RBD蛋白作為抗原以30μg/只免疫BALB/C小鼠，三周后同樣劑量加強免疫；

B?ELISA法測定免疫后小鼠血清中的抗體滴度，達到理想效果后以50μg劑量沖擊免疫；

C取免疫成功的小鼠脾細胞與SP2/0細胞進行電融合，待細胞長成細胞團后進行上清滴度檢測，通過三輪亞克隆獲得陽性單克隆細胞株；

D單克隆細胞株擴大培養后進行小鼠腹腔注射制備腹水，并從收集的腹水純化得到相應的抗體；

E利用SPR技術進行單克隆抗體的親和動力學測定；