[發(fā)明專利]一種漿母細(xì)胞與胰島免疫損傷相關(guān)性的評(píng)估方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111483867.3
• 申請(qǐng)日: 2021-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN114324860A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 畢艷;陸婧;凌清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京鼓樓醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;C12Q1/02;G01N33/50
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32462
• 代理人: 黃天天

1.一種漿母細(xì)胞與胰島免疫損傷相關(guān)性的評(píng)估方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)分離不同階段1型糖尿病病人或NOD模型動(dòng)物胰腺淋巴結(jié)組織和脾臟中的免疫細(xì)胞；優(yōu)選地，不同階段的所述NOD模型動(dòng)物為飼養(yǎng)至4周、8周、12周、16周、20周、24周的NOD模型動(dòng)物；優(yōu)選地，所述NOD模型動(dòng)物為NOD小鼠；

2)免疫細(xì)胞分析，分選漿母細(xì)胞，構(gòu)建漿母細(xì)胞含量與1型糖尿病病人或NOD模型動(dòng)物不同階段的關(guān)系，為正相關(guān)；

3)將漿母細(xì)胞或漿母細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞的組合，進(jìn)行過繼轉(zhuǎn)移，監(jiān)測(cè)發(fā)生糖尿病的速度和比例，以及胰島炎情況；

和/或，將T淋巴細(xì)胞、漿母細(xì)胞與胰島共培養(yǎng)，檢測(cè)胰島凋亡情況；

4)建立胰島炎評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)胰島中免疫細(xì)胞浸潤(rùn)程度進(jìn)行胰島炎評(píng)分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，胰島炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分，完整胰島，無免疫細(xì)胞浸潤(rùn)；1分，僅在胰島周圍有免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，或胰島內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)面積小于25％；2分，胰島內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)面積達(dá)25％-50％；3分，胰島內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)面積達(dá)50％-75％；4分，胰島內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)面積超過75％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中包括分離胰腺淋巴結(jié)和脾臟，研磨得細(xì)胞懸液，胰腺淋巴結(jié)細(xì)胞懸液離心后得到胰腺淋巴結(jié)免疫細(xì)胞；脾臟細(xì)胞沉淀中加入紅細(xì)胞裂解液，裂解后離心得到脾臟免疫細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中包括將步驟1)的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)移至流式管，加入流式抗體預(yù)混孵育，再加入細(xì)胞死活染料孵育，經(jīng)Stain buffer洗滌重懸后，使用流式細(xì)胞儀分選所需的T淋巴細(xì)胞和漿母細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中包括將T淋巴細(xì)胞與漿母細(xì)胞共同轉(zhuǎn)移至NOD/SCID小鼠，監(jiān)測(cè)隨機(jī)血糖，取得胰腺組織，切片，進(jìn)行HE染色及免疫組化染色，采集圖片。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中T淋巴細(xì)胞與漿母細(xì)胞的比例為1～10:10～1，優(yōu)選為20:2～5或2:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中檢測(cè)胰島凋亡的方法為TUNEL法。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述將T淋巴細(xì)胞與漿母細(xì)胞共同轉(zhuǎn)移為從眼底靜脈叢勻速推注；所述監(jiān)測(cè)隨機(jī)血糖為通過剪尾法監(jiān)測(cè)NOD/SCID小鼠隨機(jī)血糖。

9.一種漿母細(xì)胞用于制備胰島免疫損傷劑的用途，所述胰島免疫損傷劑任選的還可包含T淋巴細(xì)胞。

10.如權(quán)利要求9所述的漿母細(xì)胞用于制備胰島免疫損傷劑的用途，其特征在于，所述T淋巴細(xì)胞與漿母細(xì)胞的比例為1～10:10～1，優(yōu)選為2:1或20:2～5。