[發明專利]一種重組Mh-PGK蛋白及其在檢測豬源嗜血支原體中的應用

有效

• 申請號: 202111479647.3
• 申請日: 2021-12-06
• 公開（公告）號: CN114350636B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發明（設計）人: 付媛;石團員;袁秀芳;孫洪超;王德前;徐麗華;李軍星;蘇菲;郝力力;薛紅葉;劉娛霏;李天恩;余斌
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/70;C12N15/54;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一種重組Mh-PGK蛋白，其特征在于，所述重組Mh-PGK蛋白的氨基酸序列如SEQ?IDNO.1所示。

2.根據權利要求1所述的重組Mh-PGK蛋白，其特征在于，所述重組Mh-PGK蛋白是由如下方法制備而成：

以SEQ?ID?NO.2第7-1239位所示的優化后的mh-pgk基因構建重組質粒，通過表達系統表達得到所述重組Mh-PGK蛋白。

3.根據權利要求2所述的重組Mh-PGK蛋白，其特征在于，所述重組質粒為pET28-mh-pgk；所述pET28-mh-pgk是將pET-28a(+)質粒的NdeI酶和XhoI酶識別序列間的DNA片段替換為序列表中SEQ?ID?NO.2第7-1239位所示的優化后的mh-pgk基因得到的重組質粒。

4.權利要求1-3任一所述的重組Mh-PGK蛋白在如下任一種的應用：

1)在制備檢測待測動物的血清是否含有豬源嗜血支原體抗體產品中的應用；

2)在制備檢測待測動物是否感染或感染過豬源嗜血支原體產品中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述豬源嗜血支原體為Mycoplasma?suis、Mycoplasma?parvum和/或Mycoplasma?haemosuis。

6.一種豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以權利要求1-3任一所述的重組Mh-PGK蛋白作為包被抗原的酶標板。

7.根據權利要求6所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括包被液、封閉液、洗滌液、Mycoplasma?haemosuis陽性血清、Mycoplasmahaemosuis陰性血清、酶標二抗、底物顯色液和終止液中一種或多種。

8.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述重組Mh-PGK蛋白的包被濃度為0.31μg/mL。

9.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述包被液為pH9.6?0.01M的碳酸鹽緩沖液、pH7.4?0.01M的PBS或pH8.0?0.01M的Tris-HCl。

10.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述封閉液為2.5％脫脂奶粉、5％脫脂奶粉、7.5％脫脂奶粉、1％BSA、2％BSA或3％BSA。

11.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述洗滌液為PBST。

12.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG。

13.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標二抗的稀釋度為1:12500。

14.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述底物顯色液為TMB底物顯色液。

15.根據權利要求7所述的豬源嗜血支原體抗體間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述終止液為0.5M?H₂SO₄。