[發明專利]重組蛋白結構域增強TET酶及全基因組DNA甲基化檢測方法

有效

• 申請號: 202111477604.1
• 申請日: 2021-10-18
• 公開（公告）號: CN114195902B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發明（設計）人: 侯策;韋磊;江翱;陳晶晶;黃開瑜;滕以剛;曹振;宋東亮
• 申請（專利權）人: 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/10;C12Q1/6886;C40B50/06
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276
• 代理人: 朱華慶

1.一種增強TET酶，其特征在于：為在序列如SEQ?ID?No.6所示的mTET1CD蛋白的氨基端通過GGGS連接肽連接如SEQ?ID?No.1-4中任一項所示的重組蛋白結構域。

2.一種構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于其步驟包括：

（1）采用權利要求1所述的增強TET酶對模板DNA進行氧化；

（2）還原劑處理，堿中和；

（3）DNA回收，回收產物構成全基因組DNA甲基化檢測文庫。

3.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的氧化反應的反應溫度為10-40℃。

4.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的氧化反應的反應時間為0.5-2?h。

5.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的還原劑包括氫化鋁鋰、氫化硼鋰、醋酸硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、二異丁基氫化鋁、三乙基硼氫化鋰、氨硼烷、吡啶硼烷、2-甲基吡啶硼烷、硼氫化鈉、氨硼烷鋰、吡咯烷并硼氫化鋰、硼烷乙二胺、硼烷二甲胺、硼烷嗎啉絡合物、硼烷三苯基膦、硼烷二苯基膦、硼烷三乙胺、4-甲基嗎啉硼烷、硼烷三甲胺絡合物、5-乙基-2-甲基吡啶硼烷、N,N-二異丙基乙胺硼烷、硼烷四氫呋喃絡合物、硼烷二甲基硫醚絡合物中的一種或多種。

6.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（2）中還原劑的處理濃度為100-2000?mM。

7.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（2）中還原劑的處理溫度為20-50℃。

8.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（2）中還原劑的處理時間為2-24?h。

9.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的堿中和使用的是氫氧化鈉或氫氧化鉀，在反應體系中的終濃度為0.5-1.5?M。

10.根據權利要求2所述的構建全基因組DNA甲基化檢測文庫的方法，其特征在于：步驟（3）中所述的DNA回收方式指磁珠法回收、柱法回收或抽提沉淀法回收。