[發明專利]用于檢測伏馬毒素的膠體金試紙條、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202111463068.X
• 申請日: 2021-12-02
• 公開（公告）號: CN114137206A
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 王鋒;張予弦;孫鐵強;姚站馨;高蔚娜;寧保安;郭長江;左虎
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院環境醫學與作業醫學研究所
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 北京豐浩知識產權代理事務所(普通合伙) 11781
• 代理人: 董亞男

本發明涉及檢測制劑領域，具體講，涉及一種用于檢測伏馬毒素的膠體金試紙條，試劑盒及檢測方法。膠體金檢測制劑包括膠體金試紙條和酶聯反應孔，膠體金試紙條包括樣品墊、NC膜、吸收墊，NC膜上設置有T線和C線；酶聯反應孔中凍干保存有伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金；T線處包被有伏馬毒素完全抗原，用于競爭結合所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金；T線由T線抗原劃線液制備而成；C線處包被有羊抗小鼠抗體，用于捕獲未結合的所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金。本發明的伏馬毒素膠體金試紙條，通過手持式讀卡器在15min實現對伏馬毒素Fb1的定量檢測，具有線性范圍寬、檢測限低、靈敏度高的技術優勢。

技術領域

本發明涉及檢測制劑領域，具體講，涉及一種用于檢測伏馬毒素的膠體金試紙條，試劑盒及檢測方法。

背景技術

伏馬毒素是一種串珠鐮刀菌真菌分泌的毒性很強的次生代謝物，主要污染玉米，是玉米中及其制品中最常見的霉菌毒素，目前發現的伏馬毒素有11種，其中FB1污染范圍最大，毒性最強，因此對于其的檢測具有較為重要的意義。伏馬毒素可導致馬的白腦軟化癥和豬肺水腫，具有致癌性、肝毒性、腎毒性以及胚胎毒性。

檢測伏馬毒素的方法主要基于色譜法(高效液相色譜、高效液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜-串聯質譜法)和免疫學方法。基于色譜學的方法具有靈敏度高等優點，但是所需儀器昂貴、需要專業人員，不能夠滿足現場的快速檢測需要。免疫層析技術是以試紙條為載體，利用抗原抗體特異性結合進行可視化檢測的方法。通常針對小分子污染物的檢測采用免疫競爭的原理，將含有分析物的提取液與膠體金標記的抗體進行孵育，之后添加到樣品墊上，液體在毛細管作用下先后經過檢測限(T線)和質控線(C線)，根據目標物濃度的不同在T線呈現不同的顏色。從而達到對目標物定性或定量檢測的目的。由于免疫層析方法具有簡單、快速、特異性強、靈敏度高等優點，被廣泛用于食品中有毒有害小分子污染物的快速檢測中。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的首要發明目的在于提供一種檢測伏馬毒素的膠體金試紙條。

本發明的第二發明目的在于提供檢測伏馬毒素的試劑盒。

本發明的第三發明目的在于提供檢測伏馬毒素的檢測方法。

為了完成本發明的發明目的，采用的技術方案為：

本發明提出一種用于檢測伏馬毒素的膠體金檢測制劑，所述膠體金檢測制劑包括膠體金試紙條和酶聯反應孔，所述膠體金試紙條包括樣品墊、NC膜、吸收墊，所述NC膜上設置有T線和C線；其特征在于：

所述酶聯反應孔中凍干保存有伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金；伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金中伏馬毒素單克隆抗體的標記量為9～15μg/mL、優選為12μg/mL；

所述T線處包被有伏馬毒素完全抗原，用于競爭結合所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金；所述T線由T線抗原劃線液制備而成，所述T線抗原劃線液中伏馬毒素完全抗原的濃度為1.2～1.8mg/mL；

所述C線處包被有羊抗小鼠抗體，用于捕獲未結合的所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金。

可選的，所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金的制備方法：

S1、制備膠體金溶液；

S2、取OD值為1的膠體金溶液1mL，調整pH至8.5，加入9～15μg、優選為12μg/mL的伏馬毒素單克隆抗體，混勻，封閉，離心，加入洗金緩沖液，復溶沉淀，離心，最后加入重懸上樣液重懸；得到所述伏馬毒素單克隆抗體標記的膠體金。

可選的，所述洗金緩沖液中含有質量百分比濃度為0.2～1％的BSA、質量百分比濃度為1～10％的蔗糖、質量百分比濃度為0.5～2％的吐溫-20、10mM的Tris緩沖液；pH為9.0；