[發(fā)明專利]耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌、發(fā)酵液、制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111452122.0
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN114292769B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白亞妮;盧雨欣;顏宏;馮志珍;趙文娟
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西省生物農(nóng)業(yè)研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A01N63/20;A01P21/00;C05F11/08;C05G3/00;C12R1/01
• 代理公司: 重慶立信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50286
• 代理人: 劉會鋒

本發(fā)明涉及植物培育技術(shù)領(lǐng)域，公開了耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌，所述耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌命名為李斯特擬諾卡氏菌BFY2?1，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號，保藏編號為CCTCC?M?20211324，保藏日期為2021年10月26日；還公開了耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌的篩選純化方法、發(fā)酵液的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明篩選出來的菌株具有耐鹽堿功能，噴施BFY2?1菌株發(fā)酵液能夠促進(jìn)鹽堿環(huán)境中番茄的生長，當(dāng)BFY2?1菌株發(fā)酵液的OD值為0.1時，該BFY2?1菌株將受鹽堿脅迫的番茄種子的發(fā)芽率提高了14.3％；盆栽實驗中對番茄植株葉面噴施該BFY2?1菌株發(fā)酵液，番茄的株高提高了13％，鮮重提高了17％，本發(fā)明的BFY2?1菌株在大棚設(shè)施番茄的生產(chǎn)方面具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物培育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌、發(fā)酵液、制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著設(shè)施農(nóng)業(yè)的快速發(fā)展，化肥的過量施用造成了大面積的土壤次生鹽漬化，鹽漬土或堿土是土壤中可溶性鹽類或代換性鈉離子濃度達(dá)到一定程度后，土壤的pH值較高，作物難以生長的一類土壤。鹽堿化使土壤理化性質(zhì)變差，使作物根系難以吸收水分和投入肥料中的營養(yǎng)物質(zhì)，引起生理干旱和營養(yǎng)缺乏癥，導(dǎo)致作物生長發(fā)育遭受鹽害而受到抑制，從而對植物生長產(chǎn)生負(fù)面影響，造成鹽漬土中種植的作物(植物)缺苗、植株生長減弱、減產(chǎn)、甚至絕產(chǎn)，而提高植物的耐鹽性是解決次生鹽漬化的方法之一。

因為通過微生物的方法提高植物的耐鹽性不會造成二次污染，因此其成為領(lǐng)域內(nèi)的研究熱點。近年來，植物內(nèi)生菌倍受關(guān)注，發(fā)明人的前期研究證實番茄葉內(nèi)生菌對土壤鹽漬化程度有顯著影響，通過有益菌的添加，可能改善葉片菌群組成，提高菌群多樣性；而且內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物大多具有生物學(xué)活性，如抗菌、抗病毒等作用，因此可提高植物對鹽堿的耐受性，促進(jìn)植物生長，在農(nóng)業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。目前還未見關(guān)于從番茄葉中分離得到內(nèi)生李斯特擬諾卡氏菌的文獻(xiàn)報道，也沒有關(guān)于番茄葉內(nèi)生菌發(fā)酵液有耐鹽堿、植物促生作用的研究報道，因此，發(fā)明人研發(fā)了耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌、發(fā)酵液、制備方法及應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上問題，本發(fā)明提供耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌、發(fā)酵液、制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明的耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌的發(fā)酵液可提高鹽堿地番茄種子的發(fā)芽率和生長效率。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供了耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌，所述耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌命名為李斯特擬諾卡氏菌BFY2-1，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號，保藏編號為CCTCC?M?20211324，保藏日期為2021年10月26日。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了耐鹽堿番茄葉內(nèi)生菌的篩選純化方法，具體步驟如下：

(1)清洗消毒

在無菌操作臺內(nèi)，采集鹽堿土中生長的番茄新鮮葉片，用滅菌超純水洗滌30s，70％乙醇滅菌2min，5％次氯酸鈉滅菌5min，70％乙醇清洗30s，滅菌超純水潤洗5次；

(2)富集培養(yǎng)

將經(jīng)步驟(1)處理之后的新鮮番茄葉，在無菌離心管中用滅菌的鑷子搗碎，然后將搗碎的番茄葉接種于含鹽堿液體牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中，含鹽堿液體牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的組成如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，水1000ml，pH：9，NaCl含量1％，Na₂SO₄含量5％；接種后在28℃恒溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)4天；

(3)平板涂布分離純化

吸取步驟(2)中培養(yǎng)后的菌液0.1mL，用無菌水進(jìn)行梯度稀釋后涂布于含鹽堿的營養(yǎng)平板中，營養(yǎng)平板的組成如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，瓊脂15-25g，水1000ml，pH：9，NaCl含量1％，Na₂SO₄含量5％；涂布后置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，之后挑取營養(yǎng)平板上的菌，在新的上述營養(yǎng)平板上通過反復(fù)劃線的方法純化，直到得到純的單菌落。