[發明專利]一種快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111451511.1
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN114034683A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 劉銳;王繼紅;趙冰;韓曉霞;梁奕瓊;趙俊琪;劉松林;何成彥
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N21/75
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片及其制備方法和應用，屬于糖尿病檢測技術領域。本發明提供的快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片是將表面增強拉曼光譜技術與蛋白芯片相結合，利用待檢血清中抗體與芯片上抗原特異性結合，引起拉曼探針的特征峰發生藍移，從而實現快速篩查1型糖尿病的目的。同時多重免疫芯片可同時檢測多種胰島自身抗體，具體檢測迅速、檢測結果準確性高的特點，這對1型糖尿病的早期診斷和初篩方面有著良好的應用前景，同時降低了芯片制作成本。

技術領域

本發明屬于糖尿病檢測技術領域，具體涉及一種快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片及其制備方法和應用。

背景技術

糖尿病是威脅人類健康的重大疾病，糖尿病人群中約10％為1型糖尿病。1型糖尿病，以往稱為胰島素依賴型糖尿病，常發生于兒童和青少年，但也可發生于任何年齡，甚至80～90歲時也可患病。病因是由于胰島B細胞受到細胞介導的自身免疫性破壞，自身不能合成和分泌胰島素。鑒于1型糖尿病大量胰島細胞衰竭，極易發生多種并發癥，病情不易控制的特點，已成為世界重大公共衛生問題之一。不同類型的糖尿病治療方法不同，因此精準的分型診斷是給予糖尿病患者合適治療的前提。

目前，普遍認為1型糖尿病主要受外界環境因素的影響導致患者體內存在胰島自身抗體等免疫標志物，比如臨床上常檢測的谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、胰島細胞抗體(ICA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體(IA-2A)、胰島素自身抗體(IAA)、羧基肽酶抗體(CPH-A)和鋅轉運體8自身抗體(ZnT8A)。自20世紀80年代末人們最初采用Western印跡法檢測胰島自身抗體以來，檢測方法先后經歷了免疫熒光法、免疫酶活性沉淀法、放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附分析法(ELISA)、放射結合分析法(RBA)等階段。新近建立的方法有時間分辨熒光免疫法、熒光素酶免疫沉淀法(LIPS)、等離子體納米膠體金技術和電化學發光(ECL)分析法等。較早建立的Western印跡法和免疫酶活性沉淀法操作繁瑣費時，不適合臨床實際應用。免疫熒光法的非特異性熒光難以控制和消除，且胰島切片帶來異源性干擾，無法標準化。ELISA商品化試劑盒價格昂貴；離子體納米膠體金技術重現性差，有待進一步優化；LIPS法能解決抗原蛋白翻譯后的修飾問題，但變異系數較大的問題尚待解決。

表面增強拉曼光譜(Surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS)是由拉曼光譜衍生出來的一種高靈敏度、高分辨率的檢測手段，特指在物質表面拉曼散射強度得到大幅度提高的拉曼光譜技術。建立重復性好、靈敏度高、特異性強的快速、高通量、多組分、低成本蛋白檢測方法，必將是1型糖尿病未來發展趨勢。SERS是未來分子光譜研究的重要方向之一，檢測靈敏度高，可達到單分子水平。然而目前SERS檢測技術僅依賴于檢測單一免疫標志物，容易出現假陽性和假陰性，為了保證獲得準確檢測結果，常常要檢測多個生物標志物，這會大大提高檢測成本。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片及其制備方法和應用，具有較高的檢測準確性和較低的檢測成本，對改善臨床預后有積極價值。

本發明提供了一種快速診斷1型糖尿病的多重免疫芯片，包括載體和免疫芯片；所述載體帶有若干個容納腔；不同容納腔固定有不同種類免疫芯片；

所述免疫芯片的基底表面連接1種1型糖尿病標志物的捕獲抗原。

優選的，所述1型糖尿病標志物的捕獲抗原捕獲以下兩種或多種抗體：GADA、ICA、IAA、ZnT8A、IA-2A和CPH-A。

優選的，所述1型糖尿病標志物的捕獲抗原的濃度為8～12μg/ml。

優選的，所述免疫芯片的基底為羥基化硅片。

優選的，所述羥基化硅片表面形成一層納米貴金屬基底，在所述納米貴金屬基底上連接探針MBA。

優選的，所述1型糖尿病標志物的捕獲抗原通過探針MBA與免疫芯片的基底表面結合。