[發(fā)明專利]一種具有多種甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制備與應(yīng)用

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• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN114106204A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張雪梅;郭婷;肖江明
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué)國際體外診斷研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/315;C12N15/70;A61K39/145;A61K39/39;A61P31/16
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 張博

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種具有多種甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制備與應(yīng)用。所述融合蛋白為rM2e?△A146PLY蛋白，從N端到C端依次包含rM2e蛋白和△A146PLY蛋白，其中，所述rM2e蛋白包含了四段來源于家禽、豬、人甲型流感病毒M2e蛋白的公共序列，其序列如SEQ ID NO.5所示；所述△A146PLY蛋白序列為SEQ ID NO.8所示；所述rM2e?△A146PLY蛋白序列為SEQ ID NO：10所示。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)ΔA146PLY蛋白具有良好的佐劑功能，將M2e蛋白多段串聯(lián)起來表達(dá)與△A146PLY蛋白的N端，可以顯著增強(qiáng)M2e蛋白的免疫原性和保護(hù)效果。本發(fā)明提供的融合蛋白具有開發(fā)為甲型流感病毒通用疫苗的潛力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種具有多種甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)

甲型流感病毒屬于正粘科，有包膜的RNA病毒，廣泛分布于人群及家禽、豬、馬等動物體內(nèi)。甲型流感病毒抗原易變異，容易引起流感大流行。一百多年來，一共發(fā)生了五次全球大爆發(fā)的流感疫情。截止目前，每年的季節(jié)性流感也會導(dǎo)致5％-10％的世界人口感染。

目前針對甲型流感病毒的疫苗主要有滅活疫苗、減毒活疫苗、重組HA蛋白疫苗。世界衛(wèi)生組織每兩年需要召開會議，定期更換甲型流感疫苗的疫苗病毒。然而，這些疫苗仍存在容易出現(xiàn)與流行株錯配，抗原易變異，不適合老人和兒童，保護(hù)效果不好等缺點(diǎn)。經(jīng)典流感疫苗通常誘導(dǎo)對病毒表面抗原血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)產(chǎn)生抗體，主要針對其免疫顯性高變區(qū)。持續(xù)的抗原漂移使病毒容易逃避這些抗體的作用，降低了疫苗接種的有效性。而且，由于顯著的抗原差異，這些疫苗將無法預(yù)防新出現(xiàn)的大流行性流感病毒。因此，人們對開發(fā)具有更長的和更廣泛作用范圍的新疫苗非常感興趣。

甲型流感病毒共編碼10種蛋白，其中包括8種結(jié)構(gòu)蛋白：血凝素蛋白HA，神經(jīng)氨酸酶蛋白NA，基質(zhì)蛋白M1和離子通道蛋白M2，核蛋白NP，RNA多聚酶PB2、PB1和PA；此外還有兩個非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2。在甲型流感病毒的眾多抗原蛋白中，血凝素蛋白 HA抗原免疫原性強(qiáng)的頭部和保守的莖桿部，基質(zhì)蛋白M2(matrix protein 2)胞外部分M2e和位于病毒包膜內(nèi)的M1(matrix protein 1)抗原，以及核蛋白NP(nuclear protein)抗原是目前通用流感疫苗最關(guān)注的靶點(diǎn)。

其中，M2e蛋白在病毒表面體積小、豐度低，抗原不容易發(fā)生變異，有很好的保守性，是良好的通用疫苗候選蛋白。但其分子量小，免疫原性不足，有研究表明M2e本身是一種弱免疫原，只有大約一半感染甲型流感病毒的人能夠產(chǎn)生抗M2e抗體。因此大多數(shù)研究方案都會采用不同的載體來提升M2e的免疫原性。常用的方案有：基于乙肝病毒核心抗原病毒樣顆粒(HBc)的3M2e-HBc疫苗；利用納米技術(shù)將不同種屬來源的M2e蛋白包裝成顆粒增強(qiáng)其免疫原性；將HPV VLPs、木瓜花葉病毒VLPs、T7噬菌體VLPs作為VLPs平臺來展示多拷貝M2e進(jìn)而提高M(jìn)2e特異性抗體水平。

綜上所述，目前實(shí)驗(yàn)室或臨床上的多抗原通用流感疫苗常以“多抗原混合”或“多抗原串聯(lián)”的融合表達(dá)形式呈現(xiàn)在載體外部，雖然具有一定的廣譜型，但是大多數(shù)疫苗需要聯(lián)合佐劑或季節(jié)性流感疫苗才能發(fā)揮良好的效果。因此，研發(fā)一種免疫原性更好、制劑成分單一制備簡便、副作用小、保護(hù)效果更佳的甲型流感病毒通用疫苗依然具有重要的意義和廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種具有多種甲型流感病毒免疫原性的融合蛋白及其制備與應(yīng)用，用于解決現(xiàn)有的甲型流感病毒疫苗保護(hù)效果不高、覆蓋范圍不夠廣泛等問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種融合蛋白，為 rM2e-△A146PLY蛋白，所述rM2e-△A146PLY蛋白從N端到C端依次包含rM2e蛋白和△A146PLY蛋白，其中，

所述rM2e蛋白包含了四段來源于家禽、豬、人甲型流感病毒的公共序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；