[發明專利]用于檢測新型冠狀病毒的引物、探針及其應用

有效

• 申請號: 202111435667.0
• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號: CN113846191B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 柳輝;畢德熙;沈亞南;竇靜雅;鄭文果;畢少輝
• 申請（專利權）人: 深圳康美生物科技股份有限公司;北京康美天鴻生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及用于檢測新型冠狀病毒的引物、探針及其應用。本發明設計了四組引物探針，采用常用的TaqMan?MGB探針法對新型冠狀病毒進行檢測，可用于檢測新型冠狀病毒野生型、新型冠狀病毒變異株、新型冠狀病毒B.1.617亞型變異株以及新型冠狀病毒B.1.617.2亞型變異株。假病毒測試結果表明，試劑靈敏度可達到500copies/mL。10份健康志愿者和4份常見其他呼吸道病原體檢測均沒有非特異性擴增，引物探針組合及試劑特異性較好。

技術領域

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及用于檢測新型冠狀病毒的引物、探針及其應用。

背景技術

2019新型冠狀病毒SARS-CoV-2，引發新型冠狀病毒肺炎COVID-19，是目前已知的第7種可以感染人的冠狀病毒。據世界衛生組織官網顯示，目前全世界已經發現數百種新冠病毒的變種，其中，新型冠狀病毒Delta變異毒株（B.1.617.2，最早發現于印度）已傳播至全球90多個國家，Delta變異毒株可能成為全球主流傳播毒株。新型冠狀病毒Delta變異毒株具有以下特點：

(1)傳播力增強、潛伏期短：Delta變異毒株是目前WHO已經確定的幾個“須關切變異株”中傳播能力最強的，是在英國發現的Alpha變異株傳播能力的1.23倍。

(2)病毒載量高、傳染性強：數據顯示，患者體內的病毒載量比普通株要整整高出100倍，傳染性比普通株高1倍，核酸轉陰所需要的時間較長，治療周期長。

(3)致病力強、病情發展快：Delta變異毒株的致病力并沒有隨著傳播力增強而減弱，患者發病以后轉為重型、危重型的比例比以往高，而且轉為重型、危重型的時間提前，據部分國家研究發現，感染Delta變異毒株的患者可能出現的癥狀還包括胃痛、惡心、嘔吐、食欲減退、聽力損失和關節疼痛等，一些患者會出現微血栓或小血栓，嚴重時甚至會組織死亡。

(4)接種疫苗仍然有效：數據顯示，未接種過疫苗的人轉為重癥或者發生重癥的比例顯著高于接種過疫苗的人，表明接種疫苗對變異毒株仍然有免疫作用。但目前，Delta變異毒株進一步突變形成Delta plus（Delta+）變異毒株，傳播能力更強，且研究認為該突變可導致免疫逃逸。

新型冠狀病毒變異株相對于原始毒株而言，存在基因突變，這種突變實際上就是不同變異株基因組序列中單個堿基的變異，即單核苷酸多態性（SNP），不同變異毒株的檢測就是對特異性SNP進行鑒定，從而實現對不同變異株的區分。

單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)，指由于單個核苷酸堿基的改變而導致的核酸序列的多態性。在不同個體的同一條染色體或同一位點的核苷酸序列中，絕大多數核苷酸序列一致，而只有一個堿基不同的現象，即SNP，它包括單堿基的轉換、顛換、插入及缺失等形式。

SNP檢測方法眾多，大約有20多種。基因測序是基因突變鑒定標準技術，但存在鑒定時間周期長，實驗操作復雜，實驗成本等缺點。ARMS-Taqman技術即突變阻滯擴增系統，又名等位基因特異PCR，基本原理為 TaqDNA聚合酶缺少3-5'外切酶活性。在一定條件下，PCR引物3'末端的錯配導致產物的急劇減少，針對不同的已知突變，設計適當的引物可以通過PCR方法直接達到區分突變型和野生型基因的目的。ARMS的特異性引物設計完成后，還需要一對等位基因特異性熒光共振能量轉移的TaqMan探針。由于 ARMS所用的引物是從一段序列在 3'末端及其附近人為的加入錯配的突變位點的一套引物組合中，通過篩選出來的、能夠區分單個位點等位基因的引物，此方法引物設計及篩選工作量大，且結果需要通過非變異引物擴增非變異核酸的擴增曲線與變異核酸的擴增曲線的差異來判讀，誤差較大。

發明內容

本發明的目的在于提供用于檢測新型冠狀病毒的引物和探針。

本發明的再一目的在于提供上述引物和探針的應用。

本發明的再一目的在于提供檢測新型冠狀病毒的試劑盒。