[發明專利]一種鑒定雙須骨舌魚遺傳性別的引物及PCR鑒定方法

有效

• 申請號: 202111431703.6
• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN114164282B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 劉奕;牟希東;楊葉欣;劉超;宋紅梅;徐猛;房苗
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州弘邦專利商標事務所有限公司 44236
• 代理人: 程長文

本發明屬于生物檢測技術領域，公開了一種鑒定雙須骨舌魚遺傳性別的引物及PCR鑒定方法。所述引物序列為F：GATGATCACTGCAATGTTTC和R：GTGGCCAAACGCAGCATTGA。所述鑒定方法包括利用上述引物進行PCR擴增反應和瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果顯示有1187bp和676bp兩條帶的為雌性，僅有676bp條帶的為雄性。通過本發明的引物進行PCR擴增反應和瓊脂糖凝膠電泳檢測，利用電泳檢測結果目的條帶的差異來確定雙須骨舌魚的性別，操作簡單方便，鑒別結果快速準確。實現了雙須骨舌魚性別的非損傷準確鑒定。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種鑒定雙須骨舌魚遺傳性別的引物及PCR鑒定方法。

背景技術

雙須骨舌魚，俗稱銀龍魚。雙須骨舌魚雌雄魚在外部形態上不能區分，即使是在生殖季節，也很難準確辨別性別。目前仍沒有不傷害魚的前提下準確性別鑒定方法，導致繁殖效率不高，影響產業發展。

基于性別特異性分子標記，可以簡單快速地實現遺傳性別。專利CN105368948A公開了一種尼羅羅非魚性別PCR鑒定用引物及PCR鑒定方法，所述引物能夠對尼羅羅非魚的AMH基因進行特異性擴增，雄性個體生成2條特異性擴增片段，長度分別為：179bp和412bp，雌性個體生成1條長度為412bp的特異性擴增片段。能夠明顯區分，因而可以簡單、精確地對尼羅羅非魚的性別進行鑒定。專利CN?112029843?A公開了一種鑒定金錢魚遺傳性別的特異性分子標記及其引物和應用。所述分子標記為兩條在金錢魚X染色體和Y染色體中部分同源的DNA片段，該發明從金錢魚基因組信息中篩選到兩條在金錢魚X染色體和Y染色體上部分同源DNA片段，并設計特異性引物進行金錢魚遺傳性別鑒定，可以快速、準確地區分金錢魚遺傳性別。專利CN?112725427?A公開了一種基于熒光PCR技術鑒定鱘魚性別的引物、熒光探針及試劑盒，所述引物和熒光探針包括基于鱘魚W染色體特異DNA序列設計的引物WF、引物WR和熒光探針W以及基于鱘魚Z染色體特異DNA序列設計的引物ZF、引物ZR和熒光探針Z，所述試劑盒包括熒光PCR反應液、TaqDNA聚合酶、陰性對照和陽性對照，所述熒光PCR反應液包括上述引物和熒光探針；鱘魚基因組樣品在進行熒光PCR擴增后，進行Ct值分析；若兩組引物的熒光PCR結果均為陽性，則待測樣品為雌性；若W染色體特異DNA序列引物的熒光PCR結果為陰性而Z染色體特異DNA序列引物的熒光PCR結果為陽性時待測樣品為雄性。

上述現有技術均是基于不同魚類的性別特異性分子標記以實現性別鑒定。但目前仍未有關于雙須骨舌魚特異性分子標記性別鑒定的方法公開?，F有技術未能獲得雙須骨舌魚性別特異性DNA片段，也未能根據特異性片段設計相應的引物。

發明內容

針對雙須骨舌魚非損傷鑒別的難點，本發明的首要目的在于提供一種鑒定雙須骨舌魚遺傳性別的引物。

本發明的另一目的在于提供一種雙須骨舌魚遺傳性別的PCR鑒定方法。

通過本發明的引物進行PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳檢測，利用電泳結果目的條帶的差異確定雙須骨舌魚(銀龍魚)的性別，具有操作簡單方便，鑒別結果快速準確，便于推廣和使用，具有廣闊的應用前景。

本發明目的通過以下技術方案實現：

一種鑒定雙須骨舌魚遺傳性別的引物，所述引物序列如下：

F：GATGATCACTGCAATGTTTC(SEQ?ID?NO：1)；

R：GTGGCCAAACGCAGCATTGA(SEQ?ID?NO：2)。

一種雙須骨舌魚遺傳性別的PCR鑒定方法，包括如下步驟：

利用上述引物進行PCR擴增反應和瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果顯示有1187bp和676bp兩條帶的為雌性，僅有676bp條帶的為雄性。

進一步地，所述PCR擴增反應條件為：