[發(fā)明專利]一種豬萎縮性鼻炎滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111427009.7
• 申請日: 2021-11-28
• 公開（公告）號: CN114146171A
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設計）人: 董彥鵬;李玉峰;胡靜雅;肖澄;周琳;余姣;靳蒙蒙;車巧林;巫泉
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇南農(nóng)高科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/102
• 分類號: A61K39/102;A61K39/02;A61K39/39;A61P11/02;A61P29/00
• 代理公司: 廣州京諾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44407
• 代理人: 于睿虬

本發(fā)明公開了一種豬萎縮性鼻炎滅活疫苗及其制備方法，該疫苗由豬產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌、豬支氣管敗血波氏桿菌、產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌PMT毒素N端和C端蛋白與一定比例的卡波姆水佐劑混合，具有較好的免疫原性、能有效預防進行性和非進行性豬萎縮性鼻炎，提高豬的產(chǎn)能。本發(fā)明制備的豬萎縮性鼻炎滅活疫苗中除含有ZXT+Pm和AHBb抗原組分外加入rPMT?N和rPMT?C，除了預防由ZXT+Pm和AHBb引起的豬萎縮性鼻炎外，也避免由ZXT+Pm分泌的毒素蛋白產(chǎn)生的溶骨作用，加強了對豬萎縮性鼻炎的免疫保護作用。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領域，具體為一種豬萎縮性鼻炎滅活疫苗及其制備 方法。

背景技術(shù)

萎縮性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)是一類慢性呼吸道疾病，以鼻腔廣泛擴張和黏膜、黏膜下層及骨組織萎縮為主要特征，具有高度接觸傳 染性，又稱為傳染性萎縮性鼻炎或慢性萎縮性鼻炎，是公認的嚴重危害集約 化養(yǎng)豬場生產(chǎn)和發(fā)展的重要傳染性疾病之一。PAR主要由產(chǎn)毒素多殺性巴氏 桿菌和支氣管敗血波氏桿菌感染引起，常與其他類呼吸道疾病發(fā)生繼發(fā)感染， 如豬支原體病、豬藍耳病、豬喘氣病等。此病流行范圍廣，世界各地普遍發(fā) 生，在養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達地區(qū)發(fā)病率相對較高，豬群的病原檢出率較高，是危害規(guī) 模化養(yǎng)豬場的主要疾病之一，已被世界動物衛(wèi)生組織列入B類疾病。因此開 發(fā)更為有效、安全的豬萎縮性鼻炎滅活疫苗已成為迫切的需要。

目前豬萎縮性鼻炎分為進行性萎縮性鼻炎和非進行性萎縮性鼻炎，進行 性萎縮性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)，主要由多殺性巴氏桿菌 (Pasteurellamultoeida，Pm)的產(chǎn)毒菌株(DNT+Pm)引起(多為D型，少數(shù)為A 型)；另一種是非進行性萎縮性鼻炎(Non-progressive atrophie rhinitis，NPAR)， 主要由支氣管敗血波氏桿菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的I相菌引起。后 者單獨感染時，則鼻腔病變較輕，當兩者混合或繼發(fā)感染時，則鼻腔病變很 重。

PAR的病原為波氏桿菌屬的支氣管敗血波氏桿菌(Bb)以及產(chǎn)毒性多殺 性巴氏桿菌(Pm)。Bb革蘭氏染色呈陰性，無芽胞的短桿菌，有周鞭毛，能 運動；有莢膜，大多呈兩極染色，成對或散在排列，可分為Ⅰ相菌、Ⅱ相菌、 Ⅲ相菌3種菌相，但有致病作用的為Ⅰ相菌，典型的Ⅰ相菌呈珍珠狀或半圓 形，直徑約小于1mm，白色、光滑致密，β溶血環(huán)邊界不清晰。鮑-姜氏培養(yǎng) 基(BG)中加入5％～10％的無菌脫纖維綿羊全血可使菌落保持在Ⅰ相菌。臨 床研究證明單一的支氣管敗血波氏桿菌感染發(fā)病不嚴重，鼻骨的缺陷可再生， 屬于非進行性萎縮性鼻炎。多殺性巴氏桿菌(Pm)屬于革蘭氏陰性菌，兩端 鈍圓呈球狀或短桿狀，跟Bb的相同之處是不能形成芽孢，不同的是Pm不 能運動。根據(jù)脂多糖抗原分類，Pm菌株可分為5個莢膜血清組(A，B，D， E和F)和16個體細胞血清型(1至16)，而血清型A和D是引起進行 性豬萎縮性鼻炎的病原體之一，A型和D型多殺性巴氏桿菌可產(chǎn)生外毒素。 研究表明：多殺巴氏桿菌具有各種毒力因子，包括毒素、粘附素和菌毛，尤 其是皮膚壞死毒素PMT危害最大，皮膚壞死毒素PMT是一種大小約146kDa 的蛋白。

豬萎縮性鼻炎感染后癥狀多在3～4周齡或斷奶豬中出現(xiàn)，發(fā)病日齡與發(fā) 病情況呈負相關。病豬呈現(xiàn)不同程度的卡他性鼻炎特征，頻繁打噴嚏、呼吸 不暢且伴有有鼾聲等；仔豬表現(xiàn)出食欲下降，鼻孔不斷漿液性或黏液性膿性 分泌物，但病情較輕時可恢復正常。感染后期，病豬鼻甲骨和梁骨在炎癥刺 激下開始萎縮變形，鼻甲骨病變由腹側(cè)向背側(cè)延伸，兩邊鼻孔大小不一，鼻 端向病側(cè)倒歪，“歪鼻子病”因此而來。

隨著對豬萎縮性鼻炎致病機制的研究，預防該病最好的方法為疫苗免疫。 目前市場上商品化疫苗主要為滅活菌苗和類毒素苗，且發(fā)現(xiàn)類毒素苗的免疫 效果優(yōu)于滅活菌苗，但都不能達到理想的效果。因此本研究采用滅活菌苗 (ZXT+Pm和AHBb)加上重組多殺性巴氏桿菌毒素蛋白((rPMT-N和 rPMT-C))一方面可以保護仔豬不受Bb和Pm的攻擊作用，另一方面也避免 仔豬因為T+Pm產(chǎn)生的毒素蛋白溶骨作用，從而更全面的預防和保護仔豬發(fā) 生豬萎縮性鼻炎。