[發明專利]一種pH敏感脂質體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202111424966.4
• 申請日: 2021-11-26
• 公開（公告）號: CN114099698A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 王慶杰;傅相蕾;林貴梅
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: A61K47/60
• 分類號: A61K47/60;A61K47/69;A61K45/06;A61K31/555;A61K33/24;A61P35/00;A61P35/02;C07F15/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李箏

1.一種pH敏感脂質體，其特征在于，所述pH敏感脂質體由以下藥物和脂質體載體組成：(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基銨-氯鹽，二油酰磷脂酰膽堿，膽固醇琥珀酸單酯，DSPE-PEGn-pep，ICD誘導劑和腺苷通路阻斷劑。

2.如權利要求1所述的pH敏感脂質體，其特征在于，所述ICD誘導劑包括強心苷、奧沙利鉑、蒽環類藥物、米托蒽醌、阿霉素、環磷酰胺和光熱劑；

或者，所述腺苷通路阻斷劑包括CD39抑制劑、CD73抑制劑、A2aR受體抑制劑在內的小分子抑制劑和抗體藥物；

優選地，所述CD39抑制劑選擇POM-1。

3.如權利要求1所述的pH敏感脂質體，其特征在于，(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基銨-氯鹽：二油酰磷脂酰膽堿：膽固醇琥珀酸單酯：DSPE-PEGn-pep的摩爾比為(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.1～0.3)；

ICD誘導劑與(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基銨-氯鹽、二油酰磷脂酰膽堿和膽固醇琥珀酸單酯的三者總質量的比為(5～12)：100；

腺苷通路阻斷劑與ICD誘導劑的質量比為(0.5～2)：(0.5～3)，優選為1:1。

4.如權利要求1所述的pH敏感脂質體，其特征在于，DSPE-PEGn-pep中的n＝2000～5000；優選地，n＝2000,3500,5000，進一步優選地，n＝2000。

5.一種權利要求1所述的pH敏感脂質體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)合成ICD誘導劑前藥；

(2)制備多肽-PEG-N-二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE-PEGn-pep：在PLGLAG水溶液中加入EDC和NHS，室溫活化羧基，將氨基-PEG-N-二硬脂酰磷脂酰乙酰胺DSPE-PEG_n-NH₂溶解于DMF中，緩慢加入其中，攪拌反應后透析純化，冷凍干燥得到最終產物DSPE-PEGn-pep；

(3)制備ICD誘導劑脂質體：將(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基銨-氯鹽、二油酰磷脂酰膽堿、膽固醇琥珀酸單酯、ICD誘導劑前藥溶解于適量氯仿，真空旋蒸后形成脂質薄膜，與葡萄糖溶液水合攪拌，然后強制擠出得到ICD誘導劑脂質體混懸液；

(4)制備腺苷通路阻斷劑/ICD誘導劑脂質體：將步驟(3)得到的ICD誘導劑脂質體混懸液緩慢滴加到腺苷通路阻斷劑溶液中，室溫攪拌，即得腺苷通路阻斷劑/ICD誘導劑脂質體混懸液；

(5)制備POL：

在腺苷通路阻斷劑/ICD誘導劑脂質體混懸液中加入DSPE-PEGn-pep，攪拌、超濾、離心即得。

6.如權利要求5所述的pH敏感脂質體的制備方法，其特征在于，步驟(3)中與葡萄糖溶液水合的溫度為30-50℃，優選40℃；

優選地，步驟(3)中所述葡萄糖溶液的濃度為4-6％；優選地，攪拌時間為30-120min，優選60min；優選地，強制擠出采用220nm的聚碳酸酯膜過濾器進行。

7.如權利要求5所述的pH敏感脂質體的制備方法，其特征在于，步驟(4)中攪拌為室溫下800-200rpm攪拌10-12min；

或者，步驟(5)中腺苷通路阻斷劑/ICD誘導劑脂質體混懸液與DSPE-PEG2000-pep的摩爾比為100：1；

或者，步驟(5)中40-50℃攪拌反應4-5h。

8.如權利要求5所述的pH敏感脂質體的制備方法，其特征在于，當ICD誘導劑選擇奧沙利鉑時，奧沙利鉑前藥OXA-C的制備方法為：

將奧沙利鉑溶解在DMF中，加入H₂O₂溶液，并在室溫下反應得到OXA-OH；

將OXA-OH重新溶解于DMF中，加入十六烷基異氰酸酯，黑暗條件下反應24-72h；加入飽和食鹽水出現白色沉淀混合物，使用乙酸乙酯萃取后，真空濃縮混合物，真空干燥；通過凝膠柱層層析的方法獲得最終白色粉末OXA-C。