[發(fā)明專利]一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111421003.9
• 申請日: 2021-11-26
• 公開（公告）號: CN113951133A
• 公開（公告）日: 2022-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐立功;韓太利;孫繼峰;楊曉東;孫莎莎
• 申請（專利權(quán)）人: 濰坊市農(nóng)業(yè)科學院（山東省農(nóng)業(yè)科學院濰坊市分院）
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;A01H1/00
• 代理公司: 北京華智則銘知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11573
• 代理人: 李樹祥

1.一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：1）二環(huán)系雙親材料的創(chuàng)制：將變異濰農(nóng)濰縣蘿卜與高密堤東蘿卜雜交得到二環(huán)系父本W(wǎng)D-1，將天津衛(wèi)青蘿卜與變異濰農(nóng)濰蘿卜三號大青蘿卜雜交得到二環(huán)系母本TD-1；

2）DH系供體雜交后代植株的創(chuàng)制：將二環(huán)系父本W(wǎng)D-1與二環(huán)系母本TD-1進行雜交和自交后挑選出供體植株并標號為WT1-4-27、WT1-4-30，將其作為游離小孢子培養(yǎng)的供體植株；

3）優(yōu)異DH系的創(chuàng)制：先將供體植株進行春化保存，再將供體植株定植，使定植的植株待生長出花蕾后培養(yǎng)創(chuàng)制蘿卜植株，對創(chuàng)制的蘿卜植株進行倍體鑒定；

4）二倍體的根腫病抗性檢驗：將加倍處理后的再生植株18個二倍體基因型通過自交授粉后獲得種子，在蘿卜2片真葉時使用菌液用苗期鑒定和苗圃鑒定相結(jié)合的方法進行根腫病抗性鑒定；

5）DH系加倍：將優(yōu)異的康根腫病DH材料經(jīng)自交授粉、播種、修剪處理、春化處理、定植、授粉，獲得四倍體種子；

6）四倍體親本加工適應性：將4份材料的抗根腫病四倍體材料進行加工適用性檢驗；

7)適宜加工的抗根腫病蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：步驟2）中二環(huán)系父本W(wǎng)D-1與二環(huán)系母本TD-1進行雜交，對后代自交得到雜交后代，對雜交后代自交3.代后篩出供體植株并標號為WT1-4-27、WT1-4-30。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：步驟3）中優(yōu)異DH系的創(chuàng)制按如下步驟進行：

a、供體材料的保存：將供體植株以吸水紙全包裹后，放入塑料袋中，保存在0-1℃的冷庫中進行40天春化處理；

b、供體材料定植：春化結(jié)束后將供體植株定植于溫度在10-20℃的溫室內(nèi)，待第一朵花開花后，保持溫度在10-15℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：步驟3）中優(yōu)異DH系的創(chuàng)制步驟還包括：

c、蘿卜DH系的創(chuàng)制：待定植的植株生長出第一朵花后，去掉主枝花蕾，使一級側(cè)枝抽枝開花，待1級側(cè)枝有4-6朵花時，采摘頂部花蕾，選取長2-3mm花蕾，摘除剩余花蕾，使二級分枝抽枝開花；

d、將選取的蘿卜花蕾在溫度為4-6℃的冰箱中預處理24h，用75%的酒精消毒30-40s，再用0.1%的升汞消毒9-10min，無菌水沖洗5-6min，沖洗3次，處理后的花蕾放入無菌研缽中，加入B5洗滌培養(yǎng)基，收集濾液并離心，離心后加入0.1%平陽霉素并進行暗培養(yǎng)，得到以WT1-4-27為供體獲得32個再生植株，以WT1-4-30為供體獲得25個再生植株，共計57個；

e、對再生植株進行倍性鑒定，鑒定后對單倍體、雙倍體進行組培擴繁至10株/基因型，單倍體3周生根后進行加倍處理，剪去1cm根尖，留2cm的根，放入0.2%的秋水仙素中處理8小時。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：步驟4）中菌液制備步驟如下：

S1、將感根腫病白菜根，利用攪拌器將其攪碎，得到混合物；

S2、將混合物依次用2層和4層紗布進行過濾，得到濾液；

S3、將濾液在4000r/min條件下離心10-15min，棄上清液，收集沉淀；

S4、用蒸餾水將沉淀進行懸浮，步驟S2和S3重復3次，得到根腫病菌沉淀物；

S5、將根腫病菌沉淀物用蒸餾水稀釋，使其孢子濃度均為1×10⁷個·L^-1，將菌液置于容器內(nèi)，加葡萄糖至糖濃度為1%，覆蓋保鮮膜，32℃以上天氣時，在陽光下暴曬2小時后使用，以提升孢子活性。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種蘿卜種質(zhì)的創(chuàng)制方法，其特征在于：步驟4）中，接種時，用小刀在蘿卜苗根部1cm處，沿60°方向切下，向每個穴孔中澆入5ml孢子液，在蘿卜基質(zhì)內(nèi)1cm粗時調(diào)查發(fā)病情況，通過苗期鑒定獲得抗根腫病材料15份，選取性狀優(yōu)良蘿卜4份。