[發(fā)明專利]一種蛋氨酸亞砜酰亞胺快速檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111403679.5 | 申請日： | 2021-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN114166964A | 公開（公告）日： | 2022-03-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張存超;宋昱瑛;沈春雷;伍維;左帥;陳經(jīng)公;那可;陳建新 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海臻格生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74 |
| 代理公司： | 蘇州滿天星知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32573 | 代理人： | 趙靜 |
| 地址： | 201419 上海市浦東新區(qū)中國(上海)自由貿(mào)*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蛋氨酸 亞砜 亞胺 快速 檢測 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種蛋氨酸亞砜酰亞胺快速檢測方法，包括以下步驟：(1)MSX衍生：采用AQC衍生試劑，利用AccQ Tag方法分別對MSX標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣品溶液進(jìn)行衍生化處理得到衍生化標(biāo)準(zhǔn)品和衍生化待測樣品；(2)液相色譜檢測：分別將衍生化標(biāo)準(zhǔn)品和衍生化待測樣品進(jìn)行液相色譜檢測，對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣品溶液中MSX的濃度。本發(fā)明方法衍生簡單，無需復(fù)雜衍生試劑的配制或萃取，檢測快速，反應(yīng)時間短，衍生約需要10min即可。無需特殊儀器設(shè)備，且流動相配制簡單，單個流動相配制時無需與有機(jī)溶劑混合。進(jìn)樣體積約5μL，便于微量樣品的檢測。本方法的檢測下限為25pmol，比目前專利方法低80％，顯著低于目前專利報(bào)道的檢測下限。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蛋氨酸亞砜酰亞胺(L-Methionine Sulfoximine，MSX)工藝殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種MSX快速檢測方法。
背景技術(shù)：
L-蛋氨酸亞砜酰亞胺是蛋氨酸的特殊衍生物，具有氨基酸的基本結(jié)構(gòu)(氨基、羧基、R 基側(cè)鏈)。MSX是用于谷氨酰胺合成酶系統(tǒng)(GS)中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)的篩選劑，用于篩選出轉(zhuǎn)染目的基因的克隆。由于MSX是一種培養(yǎng)工藝中的添加物，作為一種工藝相關(guān)的雜質(zhì)，在最終產(chǎn)品(DP，drug product)中的殘留是監(jiān)管部門關(guān)注的。為了證實(shí)MSX在工藝中使用不影響產(chǎn)品安全性，其在DP中的殘留量需要進(jìn)行檢測。
目前，MSX的檢測方法有HPLC柱前衍生(一種MSX殘留的HPLC柱前衍生化檢測方法，專利201810410377)，然后使用常規(guī)的紫外檢測器進(jìn)行檢測。但這種方法樣品先進(jìn)行衍生，然后使用HPLC檢測。衍生使用三乙胺和異硫氰酸苯酯，還需加入正已烷后靜置，然后進(jìn)行過濾，最后進(jìn)行樣品檢測，樣品衍生程序復(fù)雜、衍生時間較長且進(jìn)樣體積較大。而且，檢測下限較高(專利201810410377檢測下限為150pmol)。因此，需要提供一種簡單快捷的蛋氨酸亞砜酰亞胺(MSX)快速檢測方法。
發(fā)明內(nèi)容：
針對背景技術(shù)提出的技術(shù)問題：目前MSX工藝殘留檢測方法衍生程序復(fù)雜、衍生時間較長；流動相配制比較復(fù)雜；而且，進(jìn)樣體積大，不利于微量樣品檢測。更重要的是，目前方法檢測下限較高，為150pmol。本發(fā)明的目的在于提供一種蛋氨酸亞砜酰亞胺(MSX) 快速檢測方法。
本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種蛋氨酸亞砜酰亞胺快速檢測方法，該方法包括以下步驟：
(1)MSX衍生：采用AQC衍生試劑6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯利用AccQ Tag方法分別對MSX標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣品溶液進(jìn)行衍生化處理得到衍生化標(biāo)準(zhǔn)品和衍生化待測樣品；
(2)液相色譜檢測：分別將衍生化標(biāo)準(zhǔn)品和衍生化待測樣品進(jìn)行液相色譜檢測，對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣品溶液中MSX的濃度；
所述液相色譜檢測的色譜條件為：Aglient Pursuit XRs 5 C18色譜柱，流動相A相為0.05～0.15mol/L乙酸鈉水溶液，pH 6.0～7.0；流動相B相為100％乙腈；色譜柱溫度為30～40℃，采用流動相進(jìn)行梯度洗脫。
作為一種優(yōu)選技術(shù)方案：所述流動相的洗脫梯度為：按體積百分含量計(jì)，洗脫開始采用 93％流動相A，7％流動相B；15min開始為82％流動相A，18％流動相B；18min開始為50％流動相A，50％流動相B；23～33min為20％流動相A，80％流動相B；33.01～40min 為93％流動相A，7％流動相B。
進(jìn)一步優(yōu)選的：所述液相色譜檢測的色譜條件為：Aglient Pursuit XRs 5 C18250×4.6 mm色譜柱，流動相A相為0.1mol/L乙酸鈉水溶液，pH 6.5；流動相B相為100％乙腈；色譜柱溫度為35℃。
更進(jìn)一步優(yōu)選的：所述檢測的波長254nm；進(jìn)樣量5μL；流動相流速為1.0ml/min。
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