[發明專利]一種調控HbCBL1和/或HbCIPK15表達的方法

在審

• 申請號: 202111401187.2
• 申請日: 2021-11-24
• 公開（公告）號: CN114134156A
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 肖小虎;方永軍;唐朝榮;莫春演;隋金蕾;龍翔宇;秦云霞;陽江華
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院橡膠研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/54;C12Q1/6895;A01G7/06
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 文小花

本發明提供一種調控HbCBL1和/或HbCIPK15基因表達的方法，具體為通過割膠刺激和/或乙烯利刺激樹體調控橡膠樹中HbCBL1和/或HbCIPK15基因表達，本發明克隆了橡膠樹HbCIPK15和HbCBL1基因的全長cDNA，首次利用酵母雙雜交實驗證實HbCIPK15和HbCBL1兩個蛋白具有較強的互作，基因表達分析表明二者的表達明顯受到乙烯利刺激和割膠的影響，說明HbCBL1?HbCIPK15調控因子在乳管信號接收和傳遞方面具有重要功能，可作為橡膠樹轉基因育種的重要靶基因，有望通過調控該基因的表達來合理調節乳管乙烯和割膠信號傳遞，進而調控橡膠樹膠乳再生，挖掘橡膠樹最大生產潛力。

技術領域

本發明涉及基因表達技術領域，特別涉及一種調控HbCBL1和/或HbCIPK15表達的方法。

背景技術

鈣離子(Ca²⁺)作為植物細胞第二信使，介導多種植物對外界刺激的應答反應，并廣泛調節各種生理過程。植物細胞內Ca²⁺濃度處于不斷的變化中，當遇到各種逆境信號，如高溫、干旱、機械傷害、激素刺激等都會引起Ca²⁺濃度的改變，不同外界信號需要不同的Ca²⁺感受器接收并傳遞信號。鈣結合蛋白，如鈣調磷酸酶B類似蛋白(CBL)，就是植物中一種重要的Ca²⁺感受器。CBL沒有激酶結構域，但它能夠特異地與蛋白激酶CIPKs發生互作，進而共同調節植物的逆境脅迫應答和生長發育。CIPK蛋白由N端蛋白激酶結構域和C端調節結構域組成，CBLs通過C端與CIPKs相互作用，C端的部分區域在不同的CIPK成員之間具有保守性。

CBL-CIPKs廣泛參與植物的各種脅迫應答反應。CBL和CIPK的生理作用首次在鹽過度敏感(SOS)途徑中被發現，在擬南芥中，SOS3(CBL4)和SOS2(CIPK24)協同作用激活擬南芥根中質膜Na⁺/H⁺逆向轉運體SOS1的活性，促使高鹽環境中細胞的Na⁺外流，從而增強植物的耐鹽性。在擬南芥中，與CIPK24/SOS2相互作用的CBL10(SCaBP8)幾乎只在芽和葉中表達并發揮作用，可能與鹽向液泡的轉運有關，從而控制細胞鹽穩態。CBL1和CBL9都以CIPK23為互作蛋白，而CIPK23可以調節鉀(K)的吸收和氣孔運動。CBL2和CBL7與CIPK11相互作用，在調節質膜H⁺-ATP酶活性發面發揮不同的作用。關于CBLs和CIPKs的研究在多種植物中均有報道，如專利CN103555740A《一種小麥CBL-CIPK類抗逆調節因子及其編碼基因與應用》公開了CBL-CIPK在提高小麥抗逆性中的作用、如CN108342412A《CIPK2在提高水稻抗/耐汞能力中的應用》公開了CIPK2在提高水稻抗/耐汞能力中的應用，還有水稻、毛果楊、油菜、梨等，表明了它們在逆境脅迫和植物生長發育過程中的重要作用。然而，CBL和CIPK基因在橡膠樹中的研究卻未見報道。

發明內容

鑒以此，本發明提出一種調控HbCBL1和/或HbCIPK15表達的方法。

本發明的技術方案是這樣實現的：

一種調控HbCBL1和/或HbCIPK15表達的方法，采用割膠或乙烯利刺激調控HbCBL1和/或HbCIPK15在橡膠中表達的方法。

優選的，所述HbCBL1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優選的，所述HbCIPK15的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

優選的，所述調控為上調或下調HbCBL1和/或HbCIPK15表達量。

優選的，所述割膠的刀次為1～9刀。

優選的，通過割膠3～9刀次，下調PR107品系的橡膠樹中HbCBL1和HbCIPK15的表達量，下調熱研8-79品系的橡膠樹中HbCBL1的表達量。