[發(fā)明專利]一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111396452.2
• 申請日: 2021-11-23
• 公開（公告）號: CN113913483B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 滿在偉;崔慧慧;陳一鳴;蔣心怡;郭靜
• 申請（專利權(quán)）人: 常州大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/12;C12P7/58;C12N1/14;C12R1/685
• 代理公司: 常州市英諾創(chuàng)信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32258
• 代理人: 王志慧

1.?一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：在海藻糖合酶催化麥芽糖制備海藻糖的過程中添加產(chǎn)葡萄糖酸黑曲霉AnM1菌體，在海藻糖合成反應(yīng)結(jié)束后回收菌體，在反應(yīng)液中添加糖化酶和黑曲霉AnM1菌體；將反應(yīng)液中剩余麥芽糖水解成葡萄糖并氧化成葡萄糖酸，獲得含海藻糖和葡萄糖酸的反應(yīng)液；其中黑曲霉的保藏編號為CCTCC?M?20211310。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述海藻糖合酶來源于谷氨酸棒桿菌（Corynebacterium?glutamicum）ATCC13032，其編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述海藻糖合酶催化麥芽糖制備海藻糖的過程，所述海藻糖合酶由重組谷氨酸棒桿菌細胞破碎液提供，或由曲拉通X-100處理重組谷氨酸棒桿菌獲得的透性化細胞提供。

4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：曲拉通X-100處理重組谷氨酸棒桿菌獲得透性化細胞是在重組谷氨酸棒桿菌培養(yǎng)并誘導合成海藻糖合酶之后于培養(yǎng)液中添加10~20?g/l曲拉通X-100在30?^oC、180?r/min條件下處理2?h，離心收集菌體并利用生理鹽水洗滌一次，獲得透性化細胞。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述在海藻糖合酶催化麥芽糖制備海藻糖的過程中添加產(chǎn)葡萄糖酸黑曲霉AnM1菌體，其中黑曲霉AnM1菌體添加量為濕重菌體1g/l，制備海藻糖的過程反應(yīng)溫度為30?^oC，搖床轉(zhuǎn)速160?r/min，通過添加碳酸鈣維持反應(yīng)體系pH。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述海藻糖合成反應(yīng)結(jié)束的特征為海藻糖合成反應(yīng)平衡海藻糖濃度增加緩慢，海藻糖合成反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液離心收集轉(zhuǎn)化液上清和透性化重組谷氨酸棒桿菌和黑曲霉AnM1菌體，收集的透性化重組谷氨酸棒桿菌和黑曲霉AnM1菌體可重復(fù)用于催化麥芽糖制備海藻糖。

7.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述在海藻糖合成反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液中添加糖化酶，所述糖化酶催化轉(zhuǎn)化液上清中剩余的麥芽糖水解成葡萄糖，所述商品化液體糖化酶活力單位為10萬U/ml，糖化酶添加量為轉(zhuǎn)化液體積的0.02%，糖化過程溫度為50?^oC，pH為4.0~5.0，當葡萄糖濃度不再增加時結(jié)束糖化。

8.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述在海藻糖合成反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液中添加黑曲霉AnM1菌體，所述添加黑曲霉AnM1菌體是在轉(zhuǎn)化液糖化后溫度降至37?^oC，添加碳酸鈣40?g/l后進行黑曲霉AnM1菌體的添加，黑曲霉AnM1菌體添加量為濕重菌體5?g/l，反應(yīng)溫度為37?^oC，搖床轉(zhuǎn)速為220?r/min，反應(yīng)體系葡萄糖濃度降至0.5~1?g/l時結(jié)束反應(yīng)，反應(yīng)液離心收集黑曲霉AnM1菌體并獲得含海藻糖和葡萄糖酸的上清。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種海藻糖和葡萄糖酸聯(lián)產(chǎn)的方法，其特征在于：所述的反應(yīng)液離心收集黑曲霉AnM1菌體可重復(fù)用于葡萄糖氧化產(chǎn)生葡萄糖酸。