[發(fā)明專利]一種抗四溴雙酚A-雙（2-羥乙基）醚單鏈抗體的氨基酸序列及其表達(dá)載體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111394509.5
• 申請(qǐng)日: 2021-11-23
• 公開（公告）號(hào): CN114106189B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林旭聰;吳星霖;何幼芬;謝增鴻
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/44
• 分類號(hào): C07K16/44;C12N15/70;C12N15/62
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學(xué)俊

本發(fā)明具體提供了一種抗四溴雙酚A?雙（2?羥乙基）醚單鏈抗體的氨基酸序列及其表達(dá)載體。所述氨基酸序列包括：一重鏈可變區(qū)的氨基酸序列，其如SEQ?ID?No.1所示；一輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，其如SEQ?ID?No.2所示。編碼該重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，編碼該輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。將所述的單鏈抗體的核苷序列克隆到帶有組氨酸標(biāo)簽麥芽糖結(jié)合蛋白的pET28a?MBP?T7?6×His表達(dá)載體中，可實(shí)現(xiàn)高可溶性表達(dá)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗四溴雙酚A-雙（2-羥乙基）醚單鏈抗體的氨基酸序列及其表達(dá)載體。

背景技術(shù)

四溴雙酚A雙（2-羥乙基）醚（TBBPA-DHEE）是一種重要的溴化阻燃劑，廣泛應(yīng)用于在日常生活用品，如油漆、電子產(chǎn)品中。使用含有TBBPA-DHEE產(chǎn)品時(shí)，TBBPA-DHEE可以擴(kuò)散到環(huán)境中，具有一定的生物濃縮性，能通過食物鏈的轉(zhuǎn)運(yùn)或者在生物體食品中蓄積，在生物體腎組織中濃度最高可達(dá)75.2~126.4ng/g干重，會(huì)影響甲狀腺的激素分泌水平，抑制其與載體蛋白的結(jié)合，對(duì)生物體的內(nèi)分泌系統(tǒng)造成干擾。因此，發(fā)展一種可簡(jiǎn)便、快捷、靈敏地檢測(cè)TBBPA-DHEE殘留的技術(shù)十分重要。

免疫學(xué)檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、檢測(cè)成本低、通量高、對(duì)技術(shù)人員的要求低的優(yōu)點(diǎn)，適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。文獻(xiàn)報(bào)道中普遍采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)TBBPA-DHEE，但以抗原免疫動(dòng)物獲得多抗或單抗是制備抗體的經(jīng)典方法，其制備周期長(zhǎng)，不易于大批量生產(chǎn)，特別是抗體制備中難以進(jìn)行人為干預(yù)改進(jìn)。基因工程單鏈抗體（Single?chainvariable?fragment，scFv）是一種利用基因工程技術(shù)將重鏈可變區(qū)（V_H）和輕鏈可變區(qū)（V_L），通過一段約5~25個(gè)氨基酸連接肽收尾拼接而成的重組抗體。其具有較低或無免疫原性、分子量小、組織穿透能力強(qiáng)、制備成本低、可大規(guī)模生產(chǎn)等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。與傳統(tǒng)的單克隆抗體相比，scFv能夠保留與親本單克隆抗體（mcAb）結(jié)構(gòu)相一致的高特異性抗原識(shí)別位點(diǎn)，具有可操作性強(qiáng)，可根據(jù)研究目的進(jìn)行改造，為篩選獲得高靈敏性重組抗體提供了簡(jiǎn)便而高效的操作系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抗四溴雙酚A雙（2-羥乙基）醚（TBBPA-DHEE）單鏈抗體的氨基酸序列及其表達(dá)載體。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種抗四溴雙酚A-雙（2-羥乙基）醚單鏈抗體的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括：

一重鏈可變區(qū)的氨基酸序列，其如SEQ?ID?No.1所示；

一輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，其如SEQ?ID?No.2?所示。

一種編碼上述的氨基酸序列的核苷酸序列，所述核苷酸序列包括：

一編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，其如SEQ?ID?No.3所示；

一編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，其如SEQ?ID?No.4所示。

一種含有上述核苷酸序列，且以帶有可溶性組氨酸標(biāo)簽麥芽糖結(jié)合蛋白的pET28a-MBP-T7-6×His表達(dá)載體為初始載體的重組質(zhì)粒。