[發明專利]一種基于DNA-銀納米團簇探針定量RNA剪接變異體的檢測方法及應用有效
| 申請號： | 202111390442.8 | 申請日： | 2021-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN114164257B | 公開（公告）日： | 2023-09-01 |
| 發明（設計）人： | 任曉君;王施政;郝就笑 | 申請（專利權）人： | 北京工業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6841 | 分類號： | C12Q1/6841 |
| 代理公司： | 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203 | 代理人： | 劉萍 |
| 地址： | 100124 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 dna 納米 探針 定量 rna 剪接 異體 檢測 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于DNA-銀納米團簇探針定量RNA剪接變異體的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
以直鏈DNA為模板，加入硝酸銀溶液，混合攪拌后加入硼氫化鈉，使其還原生成DNA-銀納米團簇，生成熒光；
直鏈DNA是一種帶有特定結構的寡核苷酸分子，分別包含富含胞嘧啶堿基的結合銀原子/離子區以及核酸靶向區，其序列5’-3’為：CCCCCCCCGCATATGCCCAATGCTGG；所述DNA-銀納米團簇探針的DNA終濃度為10-250μM，硝酸銀的終濃度為40-1500μM，硼氫化鈉的終濃度為20-500μM；還原反應溫度為0-6℃，反應時間為1-24小時；
將構建的DNA-銀納米團簇探針導入細胞中，靶向RNA剪接變異體，在激光共聚焦顯微鏡成像下在原位觀察RNA剪接變異體；
通過利用激光消蝕電感耦合等離子質譜LA-ICP-MS定量單細胞內的銀原子濃度，然后通過標準曲線及定量公式得到單細胞內RNA剪接變異體的表達量；
所述細胞為免疫細胞小鼠單核巨噬細胞RAW?264.7，所述RNA剪接變異體為RNA剪接變異體亞型MyD88S。
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