[發(fā)明專利]抗人PlGF鼠源單克隆抗體及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111372816.3
• 申請(qǐng)日: 2021-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN113801226A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 芮兵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京佰抗生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/22
• 分類號(hào): C07K16/22;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 南通英諾威訊專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32508
• 代理人: 范鑫鑫

本發(fā)明公開了抗人PlGF鼠源單克隆抗體，包括Pl?Ab1和Pl?Ab2，此抗體對(duì)PlGF蛋白具有很強(qiáng)的親和力和特異性。此外，本發(fā)明還公開了利用此抗體制備的化學(xué)發(fā)光試劑盒，具有較高的靈敏度強(qiáng)和精密度，可滿足應(yīng)用需求。可填補(bǔ)相應(yīng)的原料需求，促進(jìn)相應(yīng)檢測(cè)的完善，有利于子癇前期的預(yù)防和治療，提高生育質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗體的制備及序列測(cè)定領(lǐng)域，具體涉及抗人PlGF鼠源單克隆抗體及應(yīng)用。

背景技術(shù)

子癇前期是一種常見的產(chǎn)科疾病，約影響2%-8%的妊娠女性，在我國的發(fā)病率約為9.4%。是一種多系統(tǒng)進(jìn)展性疾病，其主要特征是在人生后半期或產(chǎn)后新發(fā)高血壓和蛋白尿，或者表現(xiàn)為新發(fā)高血壓和顯著的終末器官功能障礙，伴有或不伴有蛋白尿。此疾病的主要病因?yàn)樘ケP及母體血管功能障礙，分娩后會(huì)消退,但消退時(shí)間不確定。

胎盤生長因子(Placental growth factor,PlGF)是妊娠期重要的細(xì)胞因子，在胎兒胎盤循環(huán)過程中發(fā)揮著促進(jìn)血管生成的重要作用。目前研究表明妊娠期女性血液中PlGF濃度水平的下降發(fā)生時(shí)間要早于子癇前期臨床癥狀的發(fā)生，是較理想的子癇前期發(fā)生預(yù)測(cè)指標(biāo)。正常情況下，PlGF在胎盤和母體血液中呈現(xiàn)高表達(dá)量，且伴隨妊娠期濃度水平逐漸上升。妊娠期前三個(gè)月PlGF濃度較低，從第11-12周開始增加，并且在第30周達(dá)到峰值，之后快速下降。而在子癇前期患者中，母體血清PlGF水平低于正常妊娠女性；且子癇前期病情發(fā)展程度與PlGF水平表現(xiàn)出相關(guān)性。Levine等研究表明PlGF濃度的降低比高血壓和蛋白尿病癥的出現(xiàn)要早9-11周，同時(shí)可溶性類fms酪氨酸激酶-1（sFLT-1）濃度水平升高，sFLT-1/PlGF值可評(píng)估子癇前期和妊娠結(jié)局。綜上，對(duì)PlGF濃度水平的監(jiān)控，有利于子癇前期的臨床預(yù)防和治療，可減少不良妊娠結(jié)局的發(fā)生。

而對(duì)臨床血液樣本中PlGF濃度水平的檢測(cè)可基于于免疫學(xué)方法，比如在化學(xué)發(fā)光平臺(tái)，借助于兩株高特異性和親和力的抗體對(duì)PlGF蛋白進(jìn)行夾心法測(cè)定。目前國內(nèi)外對(duì)針對(duì)PlGF蛋白的優(yōu)質(zhì)單克隆抗體具有較大的需求。

發(fā)明內(nèi)容

為解決市場(chǎng)上對(duì)抗體原料的需求問題，本發(fā)明提供了抗人PlGF鼠源單克隆抗體，可填補(bǔ)相應(yīng)的原料需求，促進(jìn)相應(yīng)檢測(cè)的完善，有利于子癇前期的預(yù)防和治療，提高生育質(zhì)量。

同時(shí)提供檢測(cè)人PlGF檢測(cè)試劑盒，該試劑盒基于磁微粒化學(xué)發(fā)光法，結(jié)合市場(chǎng)上現(xiàn)有發(fā)光檢測(cè)儀器，可實(shí)現(xiàn)操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確。

本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

抗人PlGF鼠源單克隆抗體，包括Pl-Ab1和Pl-Ab2，

所述Pl-Ab1重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述單克隆抗體Pl-Ab2重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

抗人PlGF鼠源單克隆抗體在制備子癇前期輔助檢測(cè)診斷試劑中的應(yīng)用。

抗人PlGF鼠源單克隆抗體用于體外診斷檢測(cè)試劑盒。

檢測(cè)人PlGF的檢測(cè)試劑盒，為磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，使用Pl-Ab1和Pl-Ab2作為包被和檢測(cè)抗體。

采用重組表達(dá)基因工程技術(shù)在生物反應(yīng)器中表達(dá)目的蛋白，并將表達(dá)產(chǎn)物純化；使用目標(biāo)蛋白免疫小鼠，并利用雜交瘤融合技術(shù)構(gòu)建和篩選分泌針對(duì)目標(biāo)蛋白PlGF抗體的細(xì)胞株，經(jīng)多次亞克隆后篩選得到高親和力和特異性的單克隆抗體配對(duì)組合；同時(shí)本發(fā)明基于上述兩株單克隆抗體，提供了一種磁珠化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，性能良好，可滿足相應(yīng)的臨床需求。