[發明專利]一種豬膽鹽的生產方法

有效

• 申請號: 202111370590.3
• 申請日: 2021-11-18
• 公開（公告）號: CN114015740B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 鄧家國;李躍忠;李國軍;曾飛;盛敏;歐陽文凱;謝小國;唐雪文
• 申請（專利權）人: 常德云港生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12N1/20;C12N9/14
• 代理公司: 常德天弘知識產權代理事務所(普通合伙) 43245
• 代理人: 劉紅祥

本發明公開了一種豬膽鹽的生產方法，包括專用水解酶制備、酶水解、脫油、脫色、濃縮干燥粉碎等工藝步驟，其中酶水解包含菌株選取、制備發酵培養基、發酵、水解酶的提取、水解酶的檢測等步驟；本工藝方法解決現有工藝中反應條件劇烈、耗時長，能耗高，油脂不易去除、工藝復雜等弊端，通過選用已用菌株自行發酵生產水解酶，能將豬膽提取膽紅素以后的下料粗膽酸水解徹底完全，并進一步生產豬膽鹽。本工藝生產豬膽鹽，生產工藝簡單、耗時短、條件溫和、能耗低，對環境友好，容易實現。本工藝生產的豬膽鹽在BGLB培養基和腸道菌篩選培養基上，微生物效果特征明顯，比現有技術生產的豬膽鹽制作培養基的微生物效果明顯。

技術領域

本發明涉及膽鹽生產技術領域，具體涉及一種豬膽鹽的生產方法。

背景技術

豬膽鹽是豬的肝細胞分泌的膽汁酸類形成的鈉鹽，其主要用途為，添加在培養基中，作為革蘭氏陽性菌的抑菌劑使用，同時能促進腸道菌群生長。

利用已提取膽紅素鈣鹽后的粗膽酸生產豬膽鹽，現有的，普遍的生產工藝為純化學法。其化學工藝為：取已提取膽紅素鈣鹽的粗膽酸適量研碎，加9倍量的水及1.5倍量工業氫氧化鈉，煮沸皂化8小時以上，使粗膽酸中的膽汁酸、脂肪、蛋白及磷脂等水解完全，冷卻后，過濾，棄去少量不溶物殘渣。再脫色、酸化、形成鈉鹽、濃縮干燥，研碎，得呈淡黃色粉末的豬膽鹽產品。純化學工藝關鍵在于水解程度是否徹底，水解工藝具有反應條件劇烈、耗時長，能耗高的特點，后續生產工藝中有油脂不易去除、色深色澤差、工藝復雜等特點。

發明內容

為解決上述背景技術中提到的問題，本發明提供一種豬膽鹽的生產工藝方法。通過自制水解酶，運用此種酶水解粗膽酸生產豬膽鹽，能解決現有工藝中反應條件劇烈、耗時長，能耗高的缺點，通過后段工藝改進，能解決油脂不易去除、色深色澤差、工藝復雜等弊端。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

(一)制備專用水解酶，具體步驟如下：

(1)菌株選取及制備菌種液：選取我公司在做膽汁下料生物轉化時發現的，對豬膽汁有水解作用的細菌ATCC17666，它是桿菌，革蘭氏陰性菌，已甘油管保存。轉接傳代制作菌種液；

(2)制備發酵培養基：取牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、乳糖0.5％、磷酸氫二鉀0.1％、水，制成培養基；氨水調節PH＝7.0-7.5,于121℃，30分鐘滅菌，冷卻至60℃加入1.25％無菌卡那霉素標記溶液；

(3)發酵：待發酵罐內培養基降溫至37℃，校準DO電極，pH調整至7.0-7.5，無菌接入菌種液，通過發酵罐控制系統，平穩發酵至菌濃9-11％、發酵罐中的菌體代謝緩慢，酶活不再增加時，結束發酵；

(4)水解酶的提取：將發酵液細胞破碎儀破碎，離心，后收集上清，硫酸銨鹽析，攪拌，再離心收集酶泥，放冷庫-20℃以下保存備用；

(5)水解酶的檢測：在特定溫度35-37℃，PH5.7-5.9范圍，以粗膽酸為底物，1min水解粗膽酸生產1umolCDCA所需的酶量，定義為1個酶活單位(U)；通過液相示差定量測含量，計算水解酶的酶活量；

(二)酶水解：稱取一定量的粗膽酸，加入10倍粗膽酸的水，用氫氧化鈉水調節PH至5.7-5.9，控制溫度35-37℃，加入物料0.5％的水解酶水解1小時，液相檢測水解達95％以上停止水解；

(三)調節PH值、脫油：將上述步驟(二)中的水解液調節PH至10以上，過濾后取清液，加入粗膽酸300％的石油醚，45-50℃攪拌萃取脫油，靜置后分液得水相；

(四)脫色：將上述步驟(三)中脫油后的水相液，加入粗膽酸10％的活性碳，控制溫度70-75℃攪拌30分鐘以上脫色；

(五)濃縮干燥粉碎：將上述步驟(四)中的脫色液過濾后取清液，濃縮至流態膏狀后，放于100-130℃烘箱中，干燥至干燥失重5％以下，粉碎成末，包裝即可。