[發(fā)明專利]異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母及構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111364217.7
• 申請(qǐng)日: 2021-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN114150011B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧文玉;張傳波;魏盼盼;牌慧慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/81
• 分類號(hào): C12N15/81;C12N1/19;C12N15/60;C12N15/53;C12P7/22;C12P7/42;C12R1/865
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：向釀酒酵母中導(dǎo)入優(yōu)化的次丹參酮二烯合酶編碼基因SmCPS、優(yōu)化的次丹參酮二烯合酶編碼基因SmKSL、優(yōu)化的鐵銹醇合酶編碼基因CYP76AH1、優(yōu)化的鼠尾草酸合酶編碼基因CYP76AH24、優(yōu)化的鼠尾草酸合酶編碼基因CYP76AK6、優(yōu)化的細(xì)胞色素P450還原酶編碼基因SmCPR和優(yōu)化后并截短的細(xì)胞色素b5編碼基因t28SpCytb5；得到異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母，簡(jiǎn)稱重組菌1；

所述優(yōu)化的次丹參酮二烯合酶編碼基因SmCPS的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述優(yōu)化的次丹參酮二烯合酶編碼基因SmKSL的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

所述優(yōu)化的鐵銹醇合酶編碼基因CYP76AH1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

所述優(yōu)化的鼠尾草酸合酶編碼基因CYP76AH24的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；

所述優(yōu)化的鼠尾草酸合酶編碼基因CYP76AK6的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示；

所述優(yōu)化的細(xì)胞色素P450還原酶編碼基因SmCPR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；

所述優(yōu)化后并截短的細(xì)胞色素b5編碼基因t28SpCytb5由細(xì)胞色素SpCytb5的C端截短28個(gè)氨基酸序列獲得；

所述細(xì)胞色素SpCytb5核苷酸序列如SEQ?ID?No.7所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母的構(gòu)建方法，其特征是所述釀酒酵母為釀酒酵母Saccharomyces?cerevisiae?W303-1a。

3.異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

向權(quán)利要求1獲得的重組菌1中導(dǎo)入過氧化氫酶編碼基因ScCTT1，得到異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母，簡(jiǎn)稱重組菌2；

所述過氧化氫酶編碼基因ScCTT1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示。

4.異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

向權(quán)利要求3獲得的重組菌2中導(dǎo)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊促進(jìn)因子HAC1，得到異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母，簡(jiǎn)稱重組菌3；

所述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊促進(jìn)因子HAC1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示。

5.權(quán)利要求1或2的方法構(gòu)建的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母。

6.權(quán)利要求5的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)鼠尾草酸的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求3方法構(gòu)建的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母。

8.權(quán)利要求7的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)鼠尾草酸的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求4方法構(gòu)建的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母。

10.權(quán)利要求9的異源合成鼠尾草酸的重組釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)鼠尾草酸的應(yīng)用。